一、潮霉素B
潮霉素B (Hygromycin B )是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicu s )代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S 核糖体易位和诱导对mRNA 模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg 或hph ),编码潮霉素B 磷酸转移酶,将潮霉素B 转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B 是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418 (GeneticinTM ) ,Zeocin 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B 还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
(使用方法
1. 储存液的配制(50mg/ml)
称取0.5g 潮霉素B 加入10ml 无菌去离子水内使其完全溶解。先用5ml 无菌去离子水预湿润0.22μm 针头式过滤器,除尽水。之后使用此滤器过滤潮霉素B 溶液,除菌后分装成单次使用的小量(如1ml )放到-20℃冻存,约1年稳定。
2. 常用筛选浓度
注意:潮霉素B 用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。 3. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO 2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。)
二、G418
三、氨苄青霉素Ampicillin
氨苄青霉素Ampicillin 是半合成的盘尼西林(penicillin 青霉素)衍生物,是一种广谱的抗生素。β-内酰胺酶可以使它失活,因此要用Amp 的时候可考虑使用β-内酰胺酶抑制剂。用于抗革兰氏阳性菌的时候,它的作用类似于苄青霉素benzylpenicillin ;而用于抗革兰氏阴性菌的时候其作用类似于氯霉素chloramphenicol 和四环素tetracyclines 。在大肠杆菌中它抑制细胞壁合成。也可用于增强鲁米诺(luminol )化学发光。
Structure (结构式):
Molecular Formula(分子式): C16H 18N 3O 4SNa
Molecular Weight(分子量): 371.4
CAS # 69-52-3
Synonyms (别名): D[-]-a-Aminobenzylpenicillin; 6-[D(-)-a-Aminophenylacetamido]penicillanic acid Physical Description(物理性质): White to off-white powder
Ampicillin rapidly loses activity when stored above a pH of 7.0. Optimal conditions for storage are at +4°C, pH
3.8 to 5. At these conditions the solutions will retain more than 90% activity for approximately one week. Buffer compositions may also effect stability: Optimally Tris buffers should have a pH of approximately 5, citrate buffers at 7, acetate buffers at 6.
Autoclaving solutions of ampicillin will destroy activity. Solutions can be sterilized by filtration (0.22 um filter) and stored frozen (-20°C or below). Frozen solutions can be stored for up to 3 months.
pKa Values (at 25°C) : pKa = 2.5 (-COOH)
pKa = 7.3 (-NH2)
Suggested Effective Concentrations(建议有效浓度): 100 mg/liter for both gram positive and gram negative bacteria. It is typically stable in media at 37°C for approximately 3 days.
Solubility (溶解性): Soluble in water (50 mg/ml); soluble in 1 M Ammonium Hydroxide, dilute acids or bases; practically insoluble in alcohol, chloroform, ether and fixed oils.
四、卡那霉素(Kanamycin )
一种蛋白质生物合成抑制剂,通过与30S 核糖体结合从而致使mRNA 密码误读。
一、潮霉素B
潮霉素B (Hygromycin B )是由吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicu s )代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素,通过干扰70S 核糖体易位和诱导对mRNA 模板的错读而抑制蛋白合成,从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg 或hph ),编码潮霉素B 磷酸转移酶,将潮霉素B 转化成不具有生物活性的磷酸化产物,从而起到解毒作用。针对这一原理,潮霉素B 是一种非常有用的选择性标记,用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外,由于作用模式的差异,常与G418 (GeneticinTM ) ,Zeocin 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B 还能用作抗病毒剂,因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞,且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
(使用方法
1. 储存液的配制(50mg/ml)
称取0.5g 潮霉素B 加入10ml 无菌去离子水内使其完全溶解。先用5ml 无菌去离子水预湿润0.22μm 针头式过滤器,除尽水。之后使用此滤器过滤潮霉素B 溶液,除菌后分装成单次使用的小量(如1ml )放到-20℃冻存,约1年稳定。
2. 常用筛选浓度
注意:潮霉素B 用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。 3. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素最低浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO 2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。)
二、G418
三、氨苄青霉素Ampicillin
氨苄青霉素Ampicillin 是半合成的盘尼西林(penicillin 青霉素)衍生物,是一种广谱的抗生素。β-内酰胺酶可以使它失活,因此要用Amp 的时候可考虑使用β-内酰胺酶抑制剂。用于抗革兰氏阳性菌的时候,它的作用类似于苄青霉素benzylpenicillin ;而用于抗革兰氏阴性菌的时候其作用类似于氯霉素chloramphenicol 和四环素tetracyclines 。在大肠杆菌中它抑制细胞壁合成。也可用于增强鲁米诺(luminol )化学发光。
Structure (结构式):
Molecular Formula(分子式): C16H 18N 3O 4SNa
Molecular Weight(分子量): 371.4
CAS # 69-52-3
Synonyms (别名): D[-]-a-Aminobenzylpenicillin; 6-[D(-)-a-Aminophenylacetamido]penicillanic acid Physical Description(物理性质): White to off-white powder
Ampicillin rapidly loses activity when stored above a pH of 7.0. Optimal conditions for storage are at +4°C, pH
3.8 to 5. At these conditions the solutions will retain more than 90% activity for approximately one week. Buffer compositions may also effect stability: Optimally Tris buffers should have a pH of approximately 5, citrate buffers at 7, acetate buffers at 6.
Autoclaving solutions of ampicillin will destroy activity. Solutions can be sterilized by filtration (0.22 um filter) and stored frozen (-20°C or below). Frozen solutions can be stored for up to 3 months.
pKa Values (at 25°C) : pKa = 2.5 (-COOH)
pKa = 7.3 (-NH2)
Suggested Effective Concentrations(建议有效浓度): 100 mg/liter for both gram positive and gram negative bacteria. It is typically stable in media at 37°C for approximately 3 days.
Solubility (溶解性): Soluble in water (50 mg/ml); soluble in 1 M Ammonium Hydroxide, dilute acids or bases; practically insoluble in alcohol, chloroform, ether and fixed oils.
四、卡那霉素(Kanamycin )
一种蛋白质生物合成抑制剂,通过与30S 核糖体结合从而致使mRNA 密码误读。