科学研究
食品研究与开发
２００６．Ｖｏｌ．２７．ＮＯ．８
８３
重组高异构化率葡萄糖异构酶
酶学性质的研究
李松１，牛丹丹１，张梁１，石贵阳１，沈煜１，陈卫２，王正祥１，２，＊
（１．工业生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院，江苏无锡２１４０３６；
２．食品科学与安全教育部重点实验室江南大学食品学院，江苏无锡２１４０３６）
摘
要：葡萄糖异构酶催化Ｄ－葡萄糖形成Ｄ－果糖的异构化反应，是工业上制备高果糖浆的关键酶。介绍一种新型
重组葡萄糖异构酶（ｒＧＩ）的酶学性质。ｒＧＩ的最适作用温度为９０°Ｃ￣１００°Ｃ，最适作用ｐＨ为７．０。ｒＧＩ具有较好的热稳性，９０°在９０°Ｃ下的酶活半衰期约为５ｈ。ｒＧＩ酶活表达依赖二价金属离子。Ｃ、ｐＨ７．０和５ｈ下，ｒＧＩ异构化３０％（ｗ／ｖ）葡萄糖液为果糖的异构化率达到５４．８％。
关键词：重组葡萄糖异构酶；酶学性质；高果糖浆；异构化
ＥＮＺＹＭＡＴＩＣＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＧＬＵＣＯＳＥＩＳＯＭＥＲＡＳＥＷＩＴＨＨＩＧＨ－ＩＳＯＭＥＲＩＺＡＴＩＯＮＲＡＴＥ
ＬＩＳｏｎｇ１，ＮＩＵＤａｎ－ｄａｎ１，ＺＨＡＮＧＬｉａｎｇ１，ＳＨＩＧｕｉ－ｙａｎｇ１，ＳＨＥＮＹｕ１，ＣＨＥＮＷｅｉ２，ＷＡＮＧＺｈｅｎｇ－ｘｉａｎｇ１，２，＊（１．ＴｈｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎａｎｄＳｃｈｏｏｌｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ
ＹａｎｇｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４０３６，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＳａｆｅｔｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎａｎｄ
ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＹａｎｇｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４０３６，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＧｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅｃａｔａｌｙｚｉｎｇｉｓｏｍｅｒａｔｉｏｎｒｅａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＤ－ｇｌｕｃｏｓｅａｎｄＤ－ｆｒｕｃｔｏｓｅ，ｉｓｏｆｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｉｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈ－ｆｒｕｃｔｏｓｅｓｙｒｕｐ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆａｎｅｗｒｅｃｏｍｂｉ－Ｃ￣１００°ＣａｎｄｐＨ７．０．ｒＧＩｎａｎｔｇｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ（ｒＧＩ）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．ｒＧＩｓｈｏｗｅｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔａｃｔｉｖｉｔｙａｔ９０°
ｈａｄａｎｅｘｃｅｌｌｅｎｔｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｉｌｉｔｙｗｉｔｈｔｈｅｈａｌｆｌｉｆｅｏｆａｂｏｕｔ５ｈａｔ９０°Ｃ．Ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｍｅｔａｌｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ．ｒＧＩｉｓｏｍｅｒｉｚｅｄｇｌｕｃｏｓｅ（３０％，ｗ／ｖ）ｔｏｆｒｕｃｔｏｓｅｗｉｔｈｉｓｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ５４．８％ａｔ９０°Ｃ，ｐＨ７．０ａｎｄ５ｈ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｇｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ；ｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ；ｈｉｇｈｆｒｕｃｔｏｓｅｓｙｒｕｐ；ｉｓｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ
基金项目：新世纪优秀人才支持计划（ＮＣＥＴ－０４－０４９７）
作者简介：李松（１９８０－），男，硕士研究生，研究方向：工业微生物学和分子育种学。
＊通讯作者
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
交试验的９组数据，确为试验条件下的最佳工艺。参考文献：
［１］孙波，彭密军，杨晓燕．超声波提取杜仲叶的工艺研究［Ｊ］．林产化学
与工业，１９９９，１９（３）：６７￣７０．
３３．１
结论
白英红浆果红色素易溶于甲醇、水，能９５％乙醇、
［２］马远鸣．超声波技术［Ｍ］．西安：陕西师范学院出版社，１９８０，２∶３０．［３］张琰．药用植物白英栽培技术［Ｊ］．中国林副特产，２００１，４：２９．［４］崔建国，陈小军，孙志良，等．白毛藤生物碱的提取及体外抗菌活性
研究［Ｊ］．中兽医医药杂志，２００４，５：４１￣４２．
溶于乙酸乙酯，不溶于石油醚。生产中可用乙醇水溶液提取白英果红色素。
３．２白英红浆果的９５％乙醇、乙酸乙酯提取液都在
［５］吴亚林，黄静，潘远江．白毛藤多糖的分离和生物免疫活性研究［Ｊ］．
浙江大学学报（理学版），２００４，３１（３）：３１９￣３２１．
５３８ｎｍ±２ｎｍ处有吸收峰且干扰较小，可选择５４０ｎｍ处作为白英果红色素的测定波长。
［６］杨敬芝，郭贵明，周立新，等．白英化学成分的研究［Ｊ］．中国中药杂
志，２００２，２７（１）：４２￣４３．
３．３成熟白英果打浆超声提取条件下，各因素对白英
果红色素浸出量影响大小为：固液比＞浸提温度＞超声浸提时间＞乙醇浓度。试验条件下白英果红色素的最佳提取工艺条件：乙醇浓度８０％，固液比１：６ｋｇ／Ｌ，浸提温度４０℃，超声浸提时间７０ｍｉｎ。
［７］单长民，胡娟娟，杜冠华．白英提取物诱导人肝癌ＢＥＬ－７４０４细胞
凋亡作用［Ｊ］．中国临床药理学与治疗学，２００１，６（３）：２００￣２０３．
［８］袁志发，周静芋．试验设计与分析［Ｍ］．北京：高等教育出版社，２０００：
２９２￣２９６．
收稿日期：２００６－０３－２０
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束后所形成的果糖用分光光度计法测定［４］。
科学研究
葡萄糖异构酶（Ｇｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ，ＧＩ；ＥＣ５．３．１．５；木糖异构酶）催化Ｄ－葡萄糖生产Ｄ－果糖的异构化反应，是工业上制备高果糖浆的关键酶［１］。目前，工业上用于高果糖浆制备的ＧＩ为经过基因工程改造的固定化锈棕色链霉菌木糖异构酶。运用此酶，可以将葡萄糖浆一步异构化为Ｆ４２高果糖浆。由于Ｆ４２高果糖浆在常温下易形成难溶的结晶，需再经离子交换等后续果糖纯化步骤，可制得Ｆ５５和Ｆ９０的高果糖浆［２］。因此，提高葡萄糖异构酶的果糖异构化率将有利于高果糖浆工业制备的工艺简化和效率提高。
我们在前期的研究中，从一种木糖利用嗜热细菌中克隆并高表达了一种新型葡萄糖异构酶（ｒＧＩ；另文发表）。本文介绍ｒＧＩ的酶学性质。
１．５ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
采用１０％分离胶的不连续垂直板电泳，２５ｍＡ电泳４ｈ。考马斯亮蓝Ｒ－２５０染色［７］。
２结果
从２Ｌ重组菌Ｅｃ－ＧＩ培养物，经上述制备方法，获
２．１ｒＧＩ的制备
得约２８０００ＵｒＧＩ，再经热处理去除了约９０％左右的菌体蛋白，最终获得了１２０Ｕ／ｍＬ的粗酶液（图１），用于进一步试验。
１材料和方法
重组菌Ｅｃ－ＧＩ于ＬＢ培养基［３］中培养到对数中期，然
１．１重组葡萄糖异构酶的制备和纯化
后用０．５ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导３．５ｈ￣４ｈ。４°Ｃ下５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ收获细胞，细胞用５０ｍｍｏｌ／ＬＰＩＰＥＳ缓冲（ｐＨ７．０）－０．５ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２洗涤２次，再用相同缓冲液
液悬浮细胞。细胞用超声波破碎并在９０°Ｃ下处理
２０ｍｉｎ，再经１００００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，收集上清液，即为粗酶液。
图１重组菌Ｅｃ－ＧＩ表达ｒＧＩ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱
注：１．分子量标准（由上至下分别为１０９，６６，４５，３５和２５ｋＤ），
１．２酶学性质分析
ｒＧＩ的葡萄糖异构酶活性以其异构化葡萄糖为果糖的速率确定，反应体系为１ｍＬ（１ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖；异构１００ｍｍｏｌ／ＬＰＩＰＥＳ缓冲液，ｐＨ７．０；１ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２）。化反应在９０℃下进行３０ｍｉｎ。所形成的果糖用分光光度计法测定［４］。异构酶活力定义为：在检测条件下，每分钟产生１ｍｇ果糖所需酶量为一个单位（Ｕ）。蛋白质浓度测定按文献［５］进行。ｒＧＩ的最适作用温度、最适作用ｐＨ和金属离子依赖性的研究按文献［６］进行。
２．经９０℃处理２０ｍｉｎ的细胞上清，
３．全细胞裂解液。箭头指示分子量为５０ｋＤ的ｒＧＩ。
２．２ｒＧＩ的酶学性质
在不同温度下测定ｒＧＩ的酶活，以９５℃下测得的酶活作为参照（记为１００％），结果如图２所示。ｒＧＩ的最适作用温度为９０℃￣１００℃。在不同ｐＨ条件下测定
ｒＧＩ的酶活，以ｐＨ７．０下测得的酶活作为参照（记为１００％），结果如图３所示。ｒＧＩ的最适作用ｐＨ为７．０。不同离子下测定ｒＧＩ的酶活，以１０ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２存在下测得的酶活作为参照（记为１００％），结果如图４所示。ｒＧＩ的活性依赖Ｃｏ２＋或Ｍｇ２＋。
１．３耐热性和ｐＨ稳定性
ｒＧＩ的热稳定性测定在２０ｍｍｏｌ／ＬＰＩＰＥＳ缓冲液（ｐＨ７．０）－１ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２中进行。２０ＵｒＧＩ加入到１ｍＬ上述缓冲液中，封口后于不同温度下温浴１０ｍｉｎ，按上（ｐＨ４．０￣７．５）中进行。２０ＵｒＧＩ加入到１ｍＬ缓冲液中，封口后于９０℃下温浴１０ｍｉｎ，冰浴中冷却后，按上述方法测定残存酶活。
述方法测定残存酶活。ｐＨ稳定性测定在适应的缓冲液
１．４葡萄糖异构化试验
葡萄糖异构化反应在ｐＨ７．０，７０℃或９０℃下进行，反应时间为５ｈ，反应体积为１ｍＬ。反应体系中包含：１２０ＵｒＧＩ，１０％、（ｗ／ｖ）葡萄糖。反应结２０％或３０％
图２
温度（℃）
相对酶活力（％）
ｒＧＩ的最适作用温度
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将ｒＧＩ在不同ｐＨ缓冲液中于９０℃或１００℃下温浴１０ｍｉｎ，冰浴中冷却后，测定残存酶活，结果如图６所示。ｒＧＩ在ｐＨ６．０￣７．０之间具有较好的稳定性。
２．４ｒＧＩ介导的葡萄糖异构化反应
葡萄糖异构化反应在ｐＨ７．０，７０℃或９０℃下进行，反应时间为５ｈ，反应体积为１ｍＬ。用１２０ＵｒＧＩ介（ｗ／ｖ）葡萄糖异构化。反应结束后导１０％、２０％或３０％所形成的果糖用分光光度计法测得，葡萄糖异构化率以果糖形成率（％）表示。结果如表１所示。在７０℃下，
图３
９０℃下ｒＧＩ的最适作用ｐＨ
低浓度葡萄糖有利于果糖的形成；在９０℃下，起始葡萄糖浓度对果糖形成的影响不显著。
表１
ｒＧＩ在不同温度下异构化葡萄糖为果糖的结果
异构化率（％）
起始葡萄糖浓度（％，ｗ／ｖ）
７０℃６４．２５８．６４９．５
９０℃５８．３５６．８５４．８
１０２０３０
图４金属离子对酶活的影响
３讨论
大量利用木糖生长的细菌中所含有的木糖异构酶
注：１．未加任何金属离子２．１ｍｍｏｌ／ＬＣｏ２＋３．２ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋４．１０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃｏ２＋５．１０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋６．１０ｍｍｏｌ／ＬＭｎ２＋７．１００ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋
可用于葡萄糖异构化反应。此外，在真核细胞中，如大麦和厌氧丝状真菌Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｅ２，也发现有ＧＩ的存在［８］。由于，葡萄糖异构酶催化的葡萄糖异构化为果糖的反应为一可逆过程，在高温条件下，此反应的平衡偏向于果糖，由此有利于一步制备含果糖大于５０％的高果糖浆。因此，高温葡萄糖异构酶的获得和工业应用在高果糖浆工业进步和高效制备中具有十分重要的意义。目前，已发现的高温葡萄糖异构酶主要来源于厌氧嗜热菌，如嗜热球菌属和海洋嗜热菌属细菌，其最适作用温度在９５°Ｃ以上。来源于Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ
２．３ｒＧＩ的热稳定性和ｐＨ稳定性
将ｒＧＩ置于ｐＨ７．０缓冲液中，于不同温度下温浴
１０ｍｉｎ，然后，测定残存酶活，结果如图５所示。ｒＧＩ在８０℃，９０℃，１００℃下的酶活半衰期分别为８ｈ，５ｈ和２ｈ。
５０６８葡萄糖异构酶基因已经被克隆和在大肠杆菌中表达［６］。
由于野生菌株培养不易（厌氧）以及酶制备较困难
（产酶水平低），因此，通过基因工程技术对其进行高效
图５
ｒＧＩ的热稳定性
制备是实现其工业应用的关键步骤之一。异源表达产物（重组酶）的性质常常因为分子操作和所采用的表达宿主细胞的生理特征而发生改变，全面评价和研究异源表达产物（重组酶）的性质对实现其工业应用价值是极为重要的。
本研究结果显示，重组酶ｒＧＩ的主要酶学性质与天然酶相比，没有本质上的改变。其中，最适作用温度、最适作用ｐＨ、热稳定性与天然酶相似（未发表数据）；
ｐＨ
在金属离子依赖性方面，除对Ｍｇ２＋依赖性有所改变外，无显著改变（未发表数据）。
图６ｒＧＩ的ｐＨ稳定性
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甘油和木糖醇复合增塑剂对大豆蛋白塑料性能的影响
邹文中，杨晓泉，温其标，陈中
（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州５１０６４０）
摘
要：研究了甘油和木糖醇复合增塑剂对大豆蛋白塑料特性的影响。将甘油与木糖醇以不同比例添加到大豆蛋白
中，经压制成型制成大豆蛋白塑料。结果表明，采用复合增塑剂，大豆蛋白塑料的拉伸强度，杨氏模量均增加。复合增塑剂塑化大豆蛋白塑料存在２个玻璃化温度，分别产生在富集复合增塑剂区域和富集大豆蛋白区域。除甘油和木糖醇比率４：６外，其他比率复合增塑剂塑化塑料２个玻璃化温度之差均低于纯甘油增塑蛋白塑料的。复合增塑剂塑化塑料的吸水率增加。
关键词：大豆蛋白；塑料；复合增塑剂；力学性能
ＩＮＦＬＵＥＮＣＥＯＦＣＯＭＰＬＥＸＰＬＡＳＴＩＣＩＺＥＲＳＣＯＮＴＡＩＮＩＮＧＧＬＹＣＥＲＯＬＡＮＤＸＹＬＩＴＯＬＯＮＴＨＥ
ＳＯＹＰＲＯＴＥＩＮＰＬＡＳＴＩＣＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＳＴＩＣＳ
ＺＯＵＷｅｎ－ｚｈｏｎｇ，ＹＡＮＧＸｉａｏ－ｑｕａｎ，ＷＥＮＱｉ－ｂｉａｏ，ＣＨＥＮＺｈｏｎｇ
（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｇｌｙｃｅｒｏｌａｎｄｘｙｌｉｔｏｌｏｎｔｈｅｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎｐｌａｓｔｉｃｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ－ｔｉｃｓｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒｓｗｅｒｅｍｉｘｅｄａｎｄｈｏｔｐｒｅｓｓｍｏｌｄｅｄｆｏｒｍａｋｉｎｇｓｏｙｐｒｏ－ｔｅｉｎｐｌａｓｔｉｃｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｅｎｓｉｌｅｓｔｒｅｎｇｔｈ，Ｙｏｕｎｇ＇ｓｍｏｄｕｌｕｓｏｆｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎｐｌａｓｔｉｃｓｗｉｔｈｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｔｗｏｇｌａｓｓｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ（Ｔｇ１ａｎｄＴｇ２），ｃｏｒｒｅ－ｓｐｏｎｄｉｎｇｔｏｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒ－ｒｉｃｈａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ－ｒｉｃｈｄｏｍａｉｎｓ．ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆＴｇ２ａｎｄＴｇ１ｗｉｔｈｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｅｘｃｅｐｔｔｈｅｒａｔｉｏ４：６ｏｆｇｌｙｃｅｒｏｌａｎｄｘｙｌｉｔｏｌ．Ｗａｔｅｒａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｏｆｍｏｄｉｆｉｅｄｐｌａｓｔｉｃｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎ；ｐｌａｓｔｉｃ；ｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒ；ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｙ近年来，石油资源危机和塑料废弃物对生态环境的危害已成为人们备受关注的问题。与此同时，开发生
基金项目：广东省“十五”攻关农产品重大专项基金（２００１ＢＡ５０１Ａ０２）作者简介：邹文中（１９７７－），男，博士，研究方向：粮食、油脂与蛋白质。
物降解塑料作为解决石油资源枯竭和治理白色污染的一条有效途径也得到越来越多的重视。在可生物降解分布广、可再生等优点，资源中，大豆蛋白质以产量大、
成为独特的降解资源。目前，大豆蛋白已应用于黏合剂，涂料等领域［１￣２］。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
从葡萄糖异构化反应结果（表１）可以看出，本文介绍的葡萄糖异构酶ｒＧＩ的葡萄糖异构化率明显优于来源于棕色链霉菌木糖异构酶所介导的葡萄糖异构化率。因此，ｒＧＩ的固定化及其Ｆ５５高果糖浆一步制备工艺的研究将是后续研究的重点。参考文献：
［１］ＫｏｂａｙｅａｓｈｉＴ，ＴａｎａｋａＡ，ＴｏｓａＴ．ＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＩｍｍｏｂｉ－
ｌｉｚｅｄＢｉｏｃａｔａｌｙｓｔｓ．ＮｅｗＹｏｒｋ：ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒＩｎｃ，１９９３：１８５￣２０８．［２］姜锡瑞，段钢．新编酶制剂实用技术手册［Ｍ］．北京：中国轻工业出
版社，２００２．
［３］ＳａｍｂｒｏｏｋＪ，ＦｒｉｔｓｃｈＥＦ，ＭａｎｉａｔｉｓＴ．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ．２ｎｄｅｄ．，ＣＳＨ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ．１９８９．［４］ＤｉｓｃｈｅＺ，ＢｏｒｅｎｆｒｅｕｎｄＥ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９５１，１９２：５８３￣５８７．［５］ＢｒａｄｆｏｒｄＭＭ．ＡｎａｌＢｉｏｃｈｅｍ，１９７６，７２：２４８￣２５４．
［６］ＶｉｅｉｌｌｅＣ，ＨｅｓｓＪＭ，ＫｅｌｌｙＲＭ，ＺｅｉｋｕｓＪＧ．ＡｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，
１９９５，６１：１８６７￣１８７５．
［７］诸葛健，王正祥．工业微生物实验技术手册［Ｍ］．北京：中国轻工
业出版社，１９９４．
［８］ＨａｒｈａｎｇｉＨＲ，ＡｋｈｍａｎｏｖａＡＳ，ＥｍｍｅｎｓＲ，ｅｔａｌ．ＡｒｃｈＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，
２００３，１８０：１３４￣１４１．
收稿日期：２００６－０３－２０
科学研究
食品研究与开发
２００６．Ｖｏｌ．２７．ＮＯ．８
８３
重组高异构化率葡萄糖异构酶
酶学性质的研究
李松１，牛丹丹１，张梁１，石贵阳１，沈煜１，陈卫２，王正祥１，２，＊
（１．工业生物技术教育部重点实验室江南大学生物工程学院，江苏无锡２１４０３６；
２．食品科学与安全教育部重点实验室江南大学食品学院，江苏无锡２１４０３６）
摘
要：葡萄糖异构酶催化Ｄ－葡萄糖形成Ｄ－果糖的异构化反应，是工业上制备高果糖浆的关键酶。介绍一种新型
重组葡萄糖异构酶（ｒＧＩ）的酶学性质。ｒＧＩ的最适作用温度为９０°Ｃ￣１００°Ｃ，最适作用ｐＨ为７．０。ｒＧＩ具有较好的热稳性，９０°在９０°Ｃ下的酶活半衰期约为５ｈ。ｒＧＩ酶活表达依赖二价金属离子。Ｃ、ｐＨ７．０和５ｈ下，ｒＧＩ异构化３０％（ｗ／ｖ）葡萄糖液为果糖的异构化率达到５４．８％。
关键词：重组葡萄糖异构酶；酶学性质；高果糖浆；异构化
ＥＮＺＹＭＡＴＩＣＰＲＯＰＥＲＴＩＥＳＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＧＬＵＣＯＳＥＩＳＯＭＥＲＡＳＥＷＩＴＨＨＩＧＨ－ＩＳＯＭＥＲＩＺＡＴＩＯＮＲＡＴＥ
ＬＩＳｏｎｇ１，ＮＩＵＤａｎ－ｄａｎ１，ＺＨＡＮＧＬｉａｎｇ１，ＳＨＩＧｕｉ－ｙａｎｇ１，ＳＨＥＮＹｕ１，ＣＨＥＮＷｅｉ２，ＷＡＮＧＺｈｅｎｇ－ｘｉａｎｇ１，２，＊（１．ＴｈｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎａｎｄＳｃｈｏｏｌｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ
ＹａｎｇｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４０３６，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＳａｆｅｔｙ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎａｎｄ
ＳｃｈｏｏｌｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＹａｎｇｔｚｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｘｉ２１４０３６，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＧｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅｃａｔａｌｙｚｉｎｇｉｓｏｍｅｒａｔｉｏｎｒｅａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＤ－ｇｌｕｃｏｓｅａｎｄＤ－ｆｒｕｃｔｏｓｅ，ｉｓｏｆｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｉｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｈｉｇｈ－ｆｒｕｃｔｏｓｅｓｙｒｕｐ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆａｎｅｗｒｅｃｏｍｂｉ－Ｃ￣１００°ＣａｎｄｐＨ７．０．ｒＧＩｎａｎｔｇｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ（ｒＧＩ）ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．ｒＧＩｓｈｏｗｅｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔａｃｔｉｖｉｔｙａｔ９０°
ｈａｄａｎｅｘｃｅｌｌｅｎｔｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｉｌｉｔｙｗｉｔｈｔｈｅｈａｌｆｌｉｆｅｏｆａｂｏｕｔ５ｈａｔ９０°Ｃ．Ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓｍｅｔａｌｉｏｎ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ．ｒＧＩｉｓｏｍｅｒｉｚｅｄｇｌｕｃｏｓｅ（３０％，ｗ／ｖ）ｔｏｆｒｕｃｔｏｓｅｗｉｔｈｉｓｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ５４．８％ａｔ９０°Ｃ，ｐＨ７．０ａｎｄ５ｈ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｇｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ；ｅｎｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ；ｈｉｇｈｆｒｕｃｔｏｓｅｓｙｒｕｐ；ｉｓｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ
基金项目：新世纪优秀人才支持计划（ＮＣＥＴ－０４－０４９７）
作者简介：李松（１９８０－），男，硕士研究生，研究方向：工业微生物学和分子育种学。
＊通讯作者
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
交试验的９组数据，确为试验条件下的最佳工艺。参考文献：
［１］孙波，彭密军，杨晓燕．超声波提取杜仲叶的工艺研究［Ｊ］．林产化学
与工业，１９９９，１９（３）：６７￣７０．
３３．１
结论
白英红浆果红色素易溶于甲醇、水，能９５％乙醇、
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溶于乙酸乙酯，不溶于石油醚。生产中可用乙醇水溶液提取白英果红色素。
３．２白英红浆果的９５％乙醇、乙酸乙酯提取液都在
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５３８ｎｍ±２ｎｍ处有吸收峰且干扰较小，可选择５４０ｎｍ处作为白英果红色素的测定波长。
［６］杨敬芝，郭贵明，周立新，等．白英化学成分的研究［Ｊ］．中国中药杂
志，２００２，２７（１）：４２￣４３．
３．３成熟白英果打浆超声提取条件下，各因素对白英
果红色素浸出量影响大小为：固液比＞浸提温度＞超声浸提时间＞乙醇浓度。试验条件下白英果红色素的最佳提取工艺条件：乙醇浓度８０％，固液比１：６ｋｇ／Ｌ，浸提温度４０℃，超声浸提时间７０ｍｉｎ。
［７］单长民，胡娟娟，杜冠华．白英提取物诱导人肝癌ＢＥＬ－７４０４细胞
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收稿日期：２００６－０３－２０
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束后所形成的果糖用分光光度计法测定［４］。
科学研究
葡萄糖异构酶（Ｇｌｕｃｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅ，ＧＩ；ＥＣ５．３．１．５；木糖异构酶）催化Ｄ－葡萄糖生产Ｄ－果糖的异构化反应，是工业上制备高果糖浆的关键酶［１］。目前，工业上用于高果糖浆制备的ＧＩ为经过基因工程改造的固定化锈棕色链霉菌木糖异构酶。运用此酶，可以将葡萄糖浆一步异构化为Ｆ４２高果糖浆。由于Ｆ４２高果糖浆在常温下易形成难溶的结晶，需再经离子交换等后续果糖纯化步骤，可制得Ｆ５５和Ｆ９０的高果糖浆［２］。因此，提高葡萄糖异构酶的果糖异构化率将有利于高果糖浆工业制备的工艺简化和效率提高。
我们在前期的研究中，从一种木糖利用嗜热细菌中克隆并高表达了一种新型葡萄糖异构酶（ｒＧＩ；另文发表）。本文介绍ｒＧＩ的酶学性质。
１．５ＳＤＳ－ＰＡＧＥ
采用１０％分离胶的不连续垂直板电泳，２５ｍＡ电泳４ｈ。考马斯亮蓝Ｒ－２５０染色［７］。
２结果
从２Ｌ重组菌Ｅｃ－ＧＩ培养物，经上述制备方法，获
２．１ｒＧＩ的制备
得约２８０００ＵｒＧＩ，再经热处理去除了约９０％左右的菌体蛋白，最终获得了１２０Ｕ／ｍＬ的粗酶液（图１），用于进一步试验。
１材料和方法
重组菌Ｅｃ－ＧＩ于ＬＢ培养基［３］中培养到对数中期，然
１．１重组葡萄糖异构酶的制备和纯化
后用０．５ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导３．５ｈ￣４ｈ。４°Ｃ下５０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ收获细胞，细胞用５０ｍｍｏｌ／ＬＰＩＰＥＳ缓冲（ｐＨ７．０）－０．５ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２洗涤２次，再用相同缓冲液
液悬浮细胞。细胞用超声波破碎并在９０°Ｃ下处理
２０ｍｉｎ，再经１００００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，收集上清液，即为粗酶液。
图１重组菌Ｅｃ－ＧＩ表达ｒＧＩ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱
注：１．分子量标准（由上至下分别为１０９，６６，４５，３５和２５ｋＤ），
１．２酶学性质分析
ｒＧＩ的葡萄糖异构酶活性以其异构化葡萄糖为果糖的速率确定，反应体系为１ｍＬ（１ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖；异构１００ｍｍｏｌ／ＬＰＩＰＥＳ缓冲液，ｐＨ７．０；１ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２）。化反应在９０℃下进行３０ｍｉｎ。所形成的果糖用分光光度计法测定［４］。异构酶活力定义为：在检测条件下，每分钟产生１ｍｇ果糖所需酶量为一个单位（Ｕ）。蛋白质浓度测定按文献［５］进行。ｒＧＩ的最适作用温度、最适作用ｐＨ和金属离子依赖性的研究按文献［６］进行。
２．经９０℃处理２０ｍｉｎ的细胞上清，
３．全细胞裂解液。箭头指示分子量为５０ｋＤ的ｒＧＩ。
２．２ｒＧＩ的酶学性质
在不同温度下测定ｒＧＩ的酶活，以９５℃下测得的酶活作为参照（记为１００％），结果如图２所示。ｒＧＩ的最适作用温度为９０℃￣１００℃。在不同ｐＨ条件下测定
ｒＧＩ的酶活，以ｐＨ７．０下测得的酶活作为参照（记为１００％），结果如图３所示。ｒＧＩ的最适作用ｐＨ为７．０。不同离子下测定ｒＧＩ的酶活，以１０ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２存在下测得的酶活作为参照（记为１００％），结果如图４所示。ｒＧＩ的活性依赖Ｃｏ２＋或Ｍｇ２＋。
１．３耐热性和ｐＨ稳定性
ｒＧＩ的热稳定性测定在２０ｍｍｏｌ／ＬＰＩＰＥＳ缓冲液（ｐＨ７．０）－１ｍｍｏｌ／ＬＣｏＣｌ２中进行。２０ＵｒＧＩ加入到１ｍＬ上述缓冲液中，封口后于不同温度下温浴１０ｍｉｎ，按上（ｐＨ４．０￣７．５）中进行。２０ＵｒＧＩ加入到１ｍＬ缓冲液中，封口后于９０℃下温浴１０ｍｉｎ，冰浴中冷却后，按上述方法测定残存酶活。
述方法测定残存酶活。ｐＨ稳定性测定在适应的缓冲液
１．４葡萄糖异构化试验
葡萄糖异构化反应在ｐＨ７．０，７０℃或９０℃下进行，反应时间为５ｈ，反应体积为１ｍＬ。反应体系中包含：１２０ＵｒＧＩ，１０％、（ｗ／ｖ）葡萄糖。反应结２０％或３０％
图２
温度（℃）
相对酶活力（％）
ｒＧＩ的最适作用温度
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将ｒＧＩ在不同ｐＨ缓冲液中于９０℃或１００℃下温浴１０ｍｉｎ，冰浴中冷却后，测定残存酶活，结果如图６所示。ｒＧＩ在ｐＨ６．０￣７．０之间具有较好的稳定性。
２．４ｒＧＩ介导的葡萄糖异构化反应
葡萄糖异构化反应在ｐＨ７．０，７０℃或９０℃下进行，反应时间为５ｈ，反应体积为１ｍＬ。用１２０ＵｒＧＩ介（ｗ／ｖ）葡萄糖异构化。反应结束后导１０％、２０％或３０％所形成的果糖用分光光度计法测得，葡萄糖异构化率以果糖形成率（％）表示。结果如表１所示。在７０℃下，
图３
９０℃下ｒＧＩ的最适作用ｐＨ
低浓度葡萄糖有利于果糖的形成；在９０℃下，起始葡萄糖浓度对果糖形成的影响不显著。
表１
ｒＧＩ在不同温度下异构化葡萄糖为果糖的结果
异构化率（％）
起始葡萄糖浓度（％，ｗ／ｖ）
７０℃６４．２５８．６４９．５
９０℃５８．３５６．８５４．８
１０２０３０
图４金属离子对酶活的影响
３讨论
大量利用木糖生长的细菌中所含有的木糖异构酶
注：１．未加任何金属离子２．１ｍｍｏｌ／ＬＣｏ２＋３．２ｍｍｏｌ／ＬＣａ２＋４．１０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｃｏ２＋５．１０ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋６．１０ｍｍｏｌ／ＬＭｎ２＋７．１００ｍｍｏｌ／ＬＭｇ２＋
可用于葡萄糖异构化反应。此外，在真核细胞中，如大麦和厌氧丝状真菌Ｐｉｒｏｍｙｃｅｓｓｐ．Ｅ２，也发现有ＧＩ的存在［８］。由于，葡萄糖异构酶催化的葡萄糖异构化为果糖的反应为一可逆过程，在高温条件下，此反应的平衡偏向于果糖，由此有利于一步制备含果糖大于５０％的高果糖浆。因此，高温葡萄糖异构酶的获得和工业应用在高果糖浆工业进步和高效制备中具有十分重要的意义。目前，已发现的高温葡萄糖异构酶主要来源于厌氧嗜热菌，如嗜热球菌属和海洋嗜热菌属细菌，其最适作用温度在９５°Ｃ以上。来源于Ｔｈｅｒｍｏｔｏｇａｎｅａｐｏｌｉｔａｎａ
２．３ｒＧＩ的热稳定性和ｐＨ稳定性
将ｒＧＩ置于ｐＨ７．０缓冲液中，于不同温度下温浴
１０ｍｉｎ，然后，测定残存酶活，结果如图５所示。ｒＧＩ在８０℃，９０℃，１００℃下的酶活半衰期分别为８ｈ，５ｈ和２ｈ。
５０６８葡萄糖异构酶基因已经被克隆和在大肠杆菌中表达［６］。
由于野生菌株培养不易（厌氧）以及酶制备较困难
（产酶水平低），因此，通过基因工程技术对其进行高效
图５
ｒＧＩ的热稳定性
制备是实现其工业应用的关键步骤之一。异源表达产物（重组酶）的性质常常因为分子操作和所采用的表达宿主细胞的生理特征而发生改变，全面评价和研究异源表达产物（重组酶）的性质对实现其工业应用价值是极为重要的。
本研究结果显示，重组酶ｒＧＩ的主要酶学性质与天然酶相比，没有本质上的改变。其中，最适作用温度、最适作用ｐＨ、热稳定性与天然酶相似（未发表数据）；
ｐＨ
在金属离子依赖性方面，除对Ｍｇ２＋依赖性有所改变外，无显著改变（未发表数据）。
图６ｒＧＩ的ｐＨ稳定性
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甘油和木糖醇复合增塑剂对大豆蛋白塑料性能的影响
邹文中，杨晓泉，温其标，陈中
（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州５１０６４０）
摘
要：研究了甘油和木糖醇复合增塑剂对大豆蛋白塑料特性的影响。将甘油与木糖醇以不同比例添加到大豆蛋白
中，经压制成型制成大豆蛋白塑料。结果表明，采用复合增塑剂，大豆蛋白塑料的拉伸强度，杨氏模量均增加。复合增塑剂塑化大豆蛋白塑料存在２个玻璃化温度，分别产生在富集复合增塑剂区域和富集大豆蛋白区域。除甘油和木糖醇比率４：６外，其他比率复合增塑剂塑化塑料２个玻璃化温度之差均低于纯甘油增塑蛋白塑料的。复合增塑剂塑化塑料的吸水率增加。
关键词：大豆蛋白；塑料；复合增塑剂；力学性能
ＩＮＦＬＵＥＮＣＥＯＦＣＯＭＰＬＥＸＰＬＡＳＴＩＣＩＺＥＲＳＣＯＮＴＡＩＮＩＮＧＧＬＹＣＥＲＯＬＡＮＤＸＹＬＩＴＯＬＯＮＴＨＥ
ＳＯＹＰＲＯＴＥＩＮＰＬＡＳＴＩＣＣＨＡＲＡＣＴＥＲＩＳＴＩＣＳ
ＺＯＵＷｅｎ－ｚｈｏｎｇ，ＹＡＮＧＸｉａｏ－ｑｕａｎ，ＷＥＮＱｉ－ｂｉａｏ，ＣＨＥＮＺｈｏｎｇ
（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＳｏｕｔｈＣｈｉｎａＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０６４０，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｇｌｙｃｅｒｏｌａｎｄｘｙｌｉｔｏｌｏｎｔｈｅｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎｐｌａｓｔｉｃｓｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓ－ｔｉｃｓｗａｓｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒｓｗｅｒｅｍｉｘｅｄａｎｄｈｏｔｐｒｅｓｓｍｏｌｄｅｄｆｏｒｍａｋｉｎｇｓｏｙｐｒｏ－ｔｅｉｎｐｌａｓｔｉｃｓ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｅｎｓｉｌｅｓｔｒｅｎｇｔｈ，Ｙｏｕｎｇ＇ｓｍｏｄｕｌｕｓｏｆｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎｐｌａｓｔｉｃｓｗｉｔｈｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｔｗｏｇｌａｓｓｔｒａｎｓｉｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ（Ｔｇ１ａｎｄＴｇ２），ｃｏｒｒｅ－ｓｐｏｎｄｉｎｇｔｏｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒ－ｒｉｃｈａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ－ｒｉｃｈｄｏｍａｉｎｓ．ＴｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆＴｇ２ａｎｄＴｇ１ｗｉｔｈｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｅｘｃｅｐｔｔｈｅｒａｔｉｏ４：６ｏｆｇｌｙｃｅｒｏｌａｎｄｘｙｌｉｔｏｌ．Ｗａｔｅｒａｂｓｏｒｐｔｉｏｎｏｆｍｏｄｉｆｉｅｄｐｌａｓｔｉｃｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｏｙｐｒｏｔｅｉｎ；ｐｌａｓｔｉｃ；ｃｏｍｐｌｅｘｐｌａｓｔｉｃｉｚｅｒ；ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｙ近年来，石油资源危机和塑料废弃物对生态环境的危害已成为人们备受关注的问题。与此同时，开发生
基金项目：广东省“十五”攻关农产品重大专项基金（２００１ＢＡ５０１Ａ０２）作者简介：邹文中（１９７７－），男，博士，研究方向：粮食、油脂与蛋白质。
物降解塑料作为解决石油资源枯竭和治理白色污染的一条有效途径也得到越来越多的重视。在可生物降解分布广、可再生等优点，资源中，大豆蛋白质以产量大、
成为独特的降解资源。目前，大豆蛋白已应用于黏合剂，涂料等领域［１￣２］。
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
从葡萄糖异构化反应结果（表１）可以看出，本文介绍的葡萄糖异构酶ｒＧＩ的葡萄糖异构化率明显优于来源于棕色链霉菌木糖异构酶所介导的葡萄糖异构化率。因此，ｒＧＩ的固定化及其Ｆ５５高果糖浆一步制备工艺的研究将是后续研究的重点。参考文献：
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收稿日期：２００６－０３－２０