食品中金黄色葡萄球菌的检测
一、实验目的
1.了解金黄色葡萄球菌检测原理
2.掌握金黄色葡萄球菌鉴定要点和检验方法
二、实验原理
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固。多数金黄色葡萄球菌致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。
三、实验材料
1.样品：新鲜的购于当地超市的肉
2.菌种：金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌
3.培养基与试剂：营养肉汤培养基、血琼脂平板、Balrd-Parker氏培养基、无菌盐水、兔血浆、乙二酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%酒精、番红染液
4.器材：显微镜1台、温箱1台、研钵1个、台秤1台、无菌吸管3支、无菌试管4支、无菌培养皿8套、载玻片1片、L型涂布棒1个、酒精灯1个、接种环1个等。
四、实验方法
1、一般培养
称取25g金黄色葡萄球菌固体样品，加入225mL无菌生理盐水，制成混悬液。吸取5mL上述混悬液，接种在营养肉汤50mL培养基内，同时挑取混悬液直接在血琼脂平板和Balrd-Parker氏培养基平板上划
线分离。同时将对照菌种在上述两种平板上做划线分离接种，放置在360C温箱里培养24小时。
2.分纯培养
将上述血琼脂平板和Balrd-Parker氏培养基平板上挑取可疑菌落，先观察对照的菌落特征，再观察被检样品的菌落，并挑取可疑的菌落在血琼脂平板上进行分离纯化。若无菌生长，可以用增菌培养物在上述平板上进行划线分离，在360C温箱中培养24h后再分离纯化，挑取可疑菌落及对照菌种进行革兰氏染色以及血浆凝固酶实验
3.进行革兰氏染色实验并在显微镜下观察细菌形态。
4.形态特征
本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄状，无芽孢，五荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径为0.5~1um。在肉汤中呈浑浊生长，血琼脂平板培养基中菌落呈金黄色，有时也呈白色，大而突起，湿润，直径2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
5.血浆凝固酶实验
挑取上述可疑菌种于肉浸液肉汤，同时将金黄色葡萄球菌和藤黄八叠球菌分别接种于肉浸液肉汤中，在360C温箱中培养24h后进行血浆凝固酶实验
吸取1:4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的金黄
色葡萄球菌肉浸液培养基0.5ml，振荡摇匀，放在360C温箱内，每0.5h观察一次，观察6h，如果出现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为是阳性结果，通知以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。
五、分析
根据形态特征，血琼脂平板情况以及血浆凝固酶实验，判别检样是否有金黄色葡萄球菌。
六、参考文献
[1]李英军,刘景武.肉中金黄色葡萄球菌PCR检测模板的制备方法[J].食品与发酵工业.2007-33-11.
[2]于俐俐,邹雪芹.金黄色葡萄球菌两种检测方法的选择[J].现代商检科技.1995-05-06.
[3]韩北忠,张琳.发酵食品中金黄色葡萄球菌快速检测方法研究进展
[J].中国酿造.2005-11
[4].杜洪利,张双双.金黄色葡萄球菌检测技术研究进展[J].食品与发酵科技.1674-506X（2009）05-0012-0003
[5]王小红,谢笔钧.金黄色葡萄球菌在酸奶中的生长状况与产毒规律研究[J].食品科学.2004,11(25)-0007
[6]徐勤,巢国祥.生牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药性状研究
[J].中国卫生检验杂志. 1004-8685(2005)08-0972-02
[7].宋莲军,邓文斌.速冻食品中微生物污染状况分析[J].中国卫生检验杂志.1004-8685(2005)01-0087-01
[8]许如苏,林彩华.应用测试片快速检测食品中金黄色葡萄球菌的研究[J].食品研究与开发.2009,30(1)
[9]张兰,郑永华.出口金枪鱼中金黄色葡萄球菌测定方法比较[J].安徽农业科学.0517－6611( 2011)01－00313－02
[10]张雅琪,刘建学.食品中金黄色葡萄球菌检测方法的研究进展[J].农产品加工学刊.1671-9646( 2009 )09-0084-03
[11]高正琴,邢华,李厚达.PCR 技术在检测鼠金黄色葡萄球菌中的应用研究[J].中国实验动物学报.1005-4847(2003)01-0026-03
食品中金黄色葡萄球菌的检测
一、实验目的
1.了解金黄色葡萄球菌检测原理
2.掌握金黄色葡萄球菌鉴定要点和检验方法
二、实验原理
金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固。多数金黄色葡萄球菌致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。
三、实验材料
1.样品：新鲜的购于当地超市的肉
2.菌种：金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌
3.培养基与试剂：营养肉汤培养基、血琼脂平板、Balrd-Parker氏培养基、无菌盐水、兔血浆、乙二酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%酒精、番红染液
4.器材：显微镜1台、温箱1台、研钵1个、台秤1台、无菌吸管3支、无菌试管4支、无菌培养皿8套、载玻片1片、L型涂布棒1个、酒精灯1个、接种环1个等。
四、实验方法
1、一般培养
称取25g金黄色葡萄球菌固体样品，加入225mL无菌生理盐水，制成混悬液。吸取5mL上述混悬液，接种在营养肉汤50mL培养基内，同时挑取混悬液直接在血琼脂平板和Balrd-Parker氏培养基平板上划
线分离。同时将对照菌种在上述两种平板上做划线分离接种，放置在360C温箱里培养24小时。
2.分纯培养
将上述血琼脂平板和Balrd-Parker氏培养基平板上挑取可疑菌落，先观察对照的菌落特征，再观察被检样品的菌落，并挑取可疑的菌落在血琼脂平板上进行分离纯化。若无菌生长，可以用增菌培养物在上述平板上进行划线分离，在360C温箱中培养24h后再分离纯化，挑取可疑菌落及对照菌种进行革兰氏染色以及血浆凝固酶实验
3.进行革兰氏染色实验并在显微镜下观察细菌形态。
4.形态特征
本菌为革兰氏阳性球菌，排列是葡萄状，无芽孢，五荚膜，致病性葡萄球菌菌体较小，直径为0.5~1um。在肉汤中呈浑浊生长，血琼脂平板培养基中菌落呈金黄色，有时也呈白色，大而突起，湿润，直径2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一浑浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
5.血浆凝固酶实验
挑取上述可疑菌种于肉浸液肉汤，同时将金黄色葡萄球菌和藤黄八叠球菌分别接种于肉浸液肉汤中，在360C温箱中培养24h后进行血浆凝固酶实验
吸取1:4新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养24h的金黄
色葡萄球菌肉浸液培养基0.5ml，振荡摇匀，放在360C温箱内，每0.5h观察一次，观察6h，如果出现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为是阳性结果，通知以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。
五、分析
根据形态特征，血琼脂平板情况以及血浆凝固酶实验，判别检样是否有金黄色葡萄球菌。
六、参考文献
[1]李英军,刘景武.肉中金黄色葡萄球菌PCR检测模板的制备方法[J].食品与发酵工业.2007-33-11.
[2]于俐俐,邹雪芹.金黄色葡萄球菌两种检测方法的选择[J].现代商检科技.1995-05-06.
[3]韩北忠,张琳.发酵食品中金黄色葡萄球菌快速检测方法研究进展
[J].中国酿造.2005-11
[4].杜洪利,张双双.金黄色葡萄球菌检测技术研究进展[J].食品与发酵科技.1674-506X（2009）05-0012-0003
[5]王小红,谢笔钧.金黄色葡萄球菌在酸奶中的生长状况与产毒规律研究[J].食品科学.2004,11(25)-0007
[6]徐勤,巢国祥.生牛奶中金黄色葡萄球菌污染状况及耐药性状研究
[J].中国卫生检验杂志. 1004-8685(2005)08-0972-02
[7].宋莲军,邓文斌.速冻食品中微生物污染状况分析[J].中国卫生检验杂志.1004-8685(2005)01-0087-01
[8]许如苏,林彩华.应用测试片快速检测食品中金黄色葡萄球菌的研究[J].食品研究与开发.2009,30(1)
[9]张兰,郑永华.出口金枪鱼中金黄色葡萄球菌测定方法比较[J].安徽农业科学.0517－6611( 2011)01－00313－02
[10]张雅琪,刘建学.食品中金黄色葡萄球菌检测方法的研究进展[J].农产品加工学刊.1671-9646( 2009 )09-0084-03
[11]高正琴,邢华,李厚达.PCR 技术在检测鼠金黄色葡萄球菌中的应用研究[J].中国实验动物学报.1005-4847(2003)01-0026-03