●新进展
文章编号：１０００－１３３６（２００６）０４－０３０５－０４
《生命的化学》２００６年２６卷４期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（４）
・３０５・
胚胎干细胞的基因转录调控
曹曙
１
何志颖桑杰陈宇
１
陈亮
１
胡以平
上海２００４３３）
（第二军医大学细胞生物学教研室、１研究生管理大队学员二队，
摘要：胚胎干细胞作为一种具有多潜能性和自我更新能力的细胞，在人类等高等生物发育中占有重要地位；基
于这一特性，胚胎干细胞在临床上具有极其广阔的应用前景。转录因子ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ通过调节胚胎干细胞的基因转录，对其多潜能性和自我更新能力具有关键性的调控作用。对这一作用机制的研究，将对人类早期发育的了解和胚胎干细胞的临床应用具有积极意义。关键词：
胚胎干细胞；
ＯＣＴ４；ＳＯＸ２；ＮＡＮＯＧ
中图分类号：Ｑ２１
哺乳动物的发育均需由１个全能细胞分化形
成２００多种不同类型的细胞。从囊胚期内细胞群分离得到的胚胎干细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＥＳ
ｃｅｌｌ）在体外具有无限或较长期的自我更新能力，
并能在特定的诱导条件下分化为各种组织特异性细胞［１］。对人类ＥＳ细胞多潜能性和自我更新的转录调控体系进行研究，是了解人类早期发育和将
ＥＳ细胞成功应用于临床治疗的基础。大量针对这一调控体系的研究表明，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ这三个转录因子对ＥＳ细胞基因转录具有关键性的调控作用，可认为它们是保持ＥＳ细胞多潜能
性和自我更新的中心物质［２］。
ｍｉＲＮＡ的靶基因，而缺乏ｍｉＲＮＡ转录的ＥＳ细胞则不能进行分化［４］。此外，ｍｉＲＮＡ通过调控基因的表达在生物发育中也起到重要作用［５］。ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ被发现与１４个ｍｉＲＮＡ基因相关并至少共同调节ｍｉｒ－１３７和ｍｉｒ－３０１这两个ｍｉＲ－ＮＡ基因的表达。有实验结果提示［２］，这些涉及调控人类发育过程的ｍｉＲＮＡ基因都可能受ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的调节，而它们自身也是细胞基
因转录调控系统的重要组成部分之一。
１．ＯＣＴ４，ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的靶基因
有一组被称为ｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）的小型非编
码ＲＮＡ在基因转录中起着重要作用。最近的研究表明［３］，超过１／３的哺乳动物蛋白质编码基因是
———————————
收稿日期：
２００６－０５－１１
国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．３０２７０６０３）；上海市科委重大项目（Ｎｏ．０３ＤＪ１４０２０）
作者简介：
曹曙（１９８５—），男，汉族，本科生，Ｅ－ｍａｉｌ：
胡以平（１９５４—），男，教授，联系作者，
何志颖（１９７６—），男，博士，讲师，
Ｓｔｅｐｈｅｎ８５６１１＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ；
Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｐｈｕ＠ｓｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ；
Ｅ－ｍａｉｌ：ＺｈｉＹｉｎｇＨｅ２００２＠１６３．ｃｏｍ
Ｂｏｙｅｒ等［２］在基因组水平利用位置分析法，鉴
定出人类ＥＳ细胞中有６２３个（３％）蛋白质编码基因和５个（３％）ｍｉＲＮＡ基因的启动子与ＯＣＴ４关联。这些基因包括许多以往在小鼠ＥＳ细胞研究工作中所确定或假定的ＯＣＴ４靶基因，以及一些转录物被高度浓缩的基因，如ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ＬＥＦＴＹ２／ＥＢＡＦ、ＣＤＸ２、ＨＡＮＤ１、ＤＰＰＡ４、ＧＪＡ１／ＣＯＮＮＥＸＩＮ４３、ＦＯＸＯ１Ａ、ＣＲＩＰＴＯ／ＴＤＧＦ１和ＺＩＣ３。
同时，还有许多蛋白质编码基因和ｍｉＲＮＡ基因是ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的靶基因［２］。人类ＥＳ细胞中，分别有１２７１个（７％）和１６５７个（９％）蛋白质编码基因的启动子与ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ相关。先前在小鼠ＥＳ细胞的研究表明，由于在启动子结合
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
［１１］ｗｗｗ．ｂｉｏｃａｒｔａ．ｃｏｍ／ｐａｔｈｆｉｌｅｓ／ｈ＿ｃｈｒｅｂｐＰａｔｈｗａｙ．ａｓｐ
［１２］ＫａｂａｓｈｉｍａＴｅｔａｌ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２００３，１００（９）：
５１０７—５１１２
［１３］ＴｓａｔｓｏｓＮＧｅｔａｌ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００６，３４０（２）：
４４９—４５６
［１４］ＬｉＭＶｅｔａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００６，５５（５）：１１７９—１１８９［１５］ＤｅｎｔｉｎＲｅｔａｌ．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２００５，１１５（１０）：２８４３—２８５４［１６］
ＩｓｈｉｉＳｅｔａｌ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２００４，１０１：１５５９７—１５６０２
［１７］ＳｔｏｅｃｋｍａｎＡＫｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００４，２７９：１５６６２—１５６６９［１８］ＭａＬｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００５，２８０（１２）：１２０１９—１２０２７
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ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（４）
●ＲｅｃｅｎｔＰｒｏｇｒｅｓｓｅｓ
位点的并列关系，ＯＣＴ４和ＳＯＸ２可以协同诱导靶
基因的转录，而在人类ＥＳ细胞中，与ＯＣＴ４关联的靶基因启动子中大约有一半同时也与ＳＯＸ２相关。更令人惊讶的是，同时与ＯＣＴ４和ＳＯＸ２都相关的靶基因启动子中９０％以上也能与ＮＡＮＯＧ结合。最后经确定，至少有３５３个靶基因是
互联的自身调节网络来共同调控它们自身编码基因的转录。在小鼠ＥＳ细胞，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＮＡＮＯＧ的转录调控由ＯＣＴ４－ＳＯＸ２复合物完成，而且这３个转录因子的表达和功能是紧密相关的。这些基因调控机制在人类ＥＳ细胞也同样存在，而且ＮＡＮＯＧ也是这些基因调控机制的重要
组成部分。这种互联的自身调节网络被认为既可以缩短ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ对环境刺激的反应时间，又能增加其基因表达的稳定性［６，９］。
前馈系统和自身调节网络对ＥＳ细胞响应发育信号有重要意义。改变ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ三者共同拥有的，且３
个转录因子在这些基因启动子上的结合位点都相互接近。这提示在人类ＥＳ细胞，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＮＡＮＯＧ的靶基因有较大部分是由三者协同调节的（图１）。
ＮＡＮＯＧ的表达水平和功能状态，可以改变小鼠ＥＳ细胞的分化方向，这被认为是ＯＣＴ４和ＮＡＮＯＧ这两个基本调节器控制的信号传导通路
受到干扰的后果；而这两个基本调节器的表达水平和功能状态，与靶基因和它们自身编码基因的启动子均密切相关。这些因子相对量的改变，会干扰前馈系统和自身调节网络，改变细胞总量和细胞命运［９，１０］。
除了组成前２．２调节多条关键信号转导通路
馈系统和自身调节网络，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ进一步通过调节多条关键信号转导通路来调控许
图１
ＯＣＴ、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的靶基因［２］
多靶基因的转录，从而对ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新产生作用［２］。
在体内，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ会涉及到一些转录活性较高的基因。有研究表明［２］，一个或更多的ＥＳ细胞转录因子调控１３０３个这种转录活性较高的基因。ＥＳ细胞管家基因中，大约有一半是ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ共同的靶基因。这些基因中包括有编码参与信号转导通路Ｔｇｆ－β（如
２．ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的调节网络
研究表明［２］，２．１前馈系统和自身调节网络
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ对大量靶基因及其自身
编码基因的转录调控，主要是通过组成前馈系统和自身调节网络来实现的。由ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＮＡＮＯＧ组成的前馈系统，至少涉及到３５３个蛋白
质编码基因和２个ｍｉＲＮＡ基因。这个系统包括一
个控制着二级调节器的一级调节器，并能调节
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ共同拥有的大量靶基因。它有多重调节能力，这对于ＥＳ细胞而言是具有特殊意义的。当ＯＣＴ４和ＮＡＮＯＧ这两个基本调
节器都为正向调节时，前馈系统也会表现出与其水平一致但变化相对迟缓的活性［６］。而当调节器既有正向调节又有负向调节的时候，前馈系统则会通过一段缓冲时间来延迟或抵消上游调节器对下游调节器的调控从而发挥作用［７］。在ＥＳ“开关”细胞，这种多重调节能力对于其保持多潜能性的同时，又保持对分化信号作出恰当反应具有一定作用［８］。
此外，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ还通过组成
ＴＤＧＦ１、ＬＥＦＴＹ２／ＥＢＡＦ）和Ｗｎｔ（如ＤＫＫ１、ＦＲＡＴ２）
的蛋白质的基因。而信号转导通路Ｔｇｆ－β及Ｗｎｔ都将对保持ＥＳ细胞多潜能性和自我更新发挥作用。这提示，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ会通过诱导或阻遏ＴＤＧＦ１、ＬＥＦＴＹ２／ＥＢＡＦ、ＤＫＫ１、ＦＲＡＴ２、ＤＫＫ１和ＦＲＡＴ２的表达，来上调或下调Ｔｇｆ－β及Ｗｎｔ这两条关键信号转导通路，从而调控ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新作用。
此外，在这些由ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ共
同调控的转录活性较高的基因中，还包括有
ＳＴＡＴ３等转录因子的编码基因［２］。在小鼠ＥＳ细胞，ＳＴＡＴ３是调控自我更新功能的关键调节器，它所参与调控的ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３信号转导通路是与细
胞增殖分化有关的重要信号转导通路，
在小鼠发
●新进展
《生命的化学》２００６年２６卷４期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（４）
・３０７・
育过程中起到重要作用［１１］。这提示，在人类ＥＳ细
胞中，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ也可能通过调节
在肠道组织细胞时，将诱导细胞迅速增殖，而当
ＳＴＡＴ３的表达来调控ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３信号转导通路，
从而对细胞的增殖分化产生作用。
２．３阻遏低转录活性的基因ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ在体内也涉及到一些转录活性较低的基
因。在这些转录活性较低的基因中，Ｂｏｙｅｒ等［２］发现了一些被显著强化的转录因子编码基因，其中一部分还与生物发育有关。这部分基因编码的转录因子对ＥＳ细胞分化为内胚层、中胚层和外胚层细胞具有重要作用。此外，大约有一半受
ＯＣＴ４基因关闭时则出现相反的情况。已证实ＯＣＴ４的这种作用是通过其对ＤＮＡ去甲基作用的控制来实现的［１３］。ＳＯＸ２则通过自身的ＨＭＧ区域和ＯＣＴ４的ＰＯＵ区域来介导它与ＯＣＴ４之间的协
同作用，并在两者其他区域的参与之下实现对其靶基因的转录激活。另外，ＳＯＸ２还在中枢神经系统的发育中起作用，它可抑制中枢神经系统中成熟神经元的分化［１４］。又有研究表明［１５］，ＮＡＮＯＧ作用于维持ＥＳ细胞的多潜能性，而它的过表达则会导致ＥＳ细胞在接触分化诱导因子后仍保持多潜能性和自我更新，并不分化成其他细胞。
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ共同调控的转录因子是
低活性编码和转录的，而它们又是在生物发育过程中占据重要位置的同源结构域蛋白质。这说明
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ可以协同调控一组在生
物发育进程中起关键作用的可阻遏基因，从而调节生物的发育过程。
４．其他调节因子
ＥＳ细胞转录调控系统除了ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ这３个基本调节因子外，还有许多其他
调节因子参与其中。前面已经提到涉及人类ＥＳ细胞发育过程调控的ｍｉＲＮＡ基因在受ＯＣＴ４、
３．ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的调控结果
作为一个协同作用的团队，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ调控的同时，本身也是细胞基因
转录调控系统的重要组成部分。另外，一些受
ＮＡＮＯＧ通过它们共同组成的调控网络，诱导它
们自身的编码基因和编码关键信号转导通路组成部件的基因，并阻遏某些在发育过程中起关键作用的基因，从而调控ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新以及生物的早期发育［２］。
在保持ＥＳ细胞的基本特性和生物的早期发育中，ＯＣＴ４和ＮＡＮＯＧ被认为是两个基本调节器，而ＳＯＸ２则通过和ＯＣＴ４组成异二聚体发挥协同调控作用。三者的表达水平和功能状态，将直接对ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新乃至生物的早期发育产生影响。先前在小鼠ＥＳ细胞的研究表明［９，１１］，对ＯＣＴ４或ＮＡＮＯＧ的破坏将导致ＥＳ细胞不恰当的分化成滋养外胚层和胎膜内皮层，
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ调控的转录因子编码基因（ＲＥＳＴ、ＳＫＩＬ、ＨＥＳＸ１和ＳＴＡＴ３等）所编码的转
录因子自身，就可以调控某些特殊基因的转录。比如，在ＥＳ细胞中含量丰富的ＲＥＳＴ可以阻遏神经元特定基因的转录［１６］。ＳＫＩＬ则通过控制信号转导通路Ｔｇｆ－β的下游元件ＳＭＡＤ２和ＳＭＡＤ４来发挥对基因转录的调控作用［１７］。
５．结语
对ＥＳ细胞基因转录调控机制的研究，有助
于我们加深对细胞生物学、发育学以及人类健康的理解。了解这一作用机制将对我们控制细胞命运，及将ＥＳ细胞成功应用于组织修复和肿瘤治疗等临床领域产生积极作用。虽然我们已经清楚
ＯＣＴ４表达下降诱导ＥＳ细胞分化形成滋养外胚层，ＮＡＮＯＧ缺失则使ＥＳ细胞向体壁和内脏内胚层分化，而ＯＣＴ４表达增加引起ＥＳ细胞向原始内胚层和中胚层的分化；若ＮＡＮＯＧ表达正常或增加，则能维持ＥＳ细胞的多能性。Ｍｉｔｓｕｉ等［９］针对ＯＣＴ４与ＮＡＮＯＧ在ＥＳ细胞中的作用特点，提出
了它们可能在胚胎发育的不同阶段起作用。胚胎发育早期有两个阶段：比较早期的桑椹胚阶段和植入前的囊胚阶段。ＯＣＴ４在这两个阶段中都起作用，而ＮＡＮＯＧ则在第二个阶段中起关键作用。在人类ＥＳ细胞，ＯＣＴ４的表达可使其保持幼稚状态，不分化为组织特异细胞［１２］。当这种表达出现
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ作为基本调节因子，可
以诱导它们自身的编码基因和编码关键信号转导通路组成部件的基因，以及阻遏某些在发育过程中起关键作用的基因，从而调控ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新以及生物的早期发育，但对ＥＳ细胞基因转录调控机制的探究仍有不少问题，如我们对这３个基本调节因子的具体作用原理仍不十分清楚，并且我们也无法确定除这３个基本调节因子之外，是否还存在其他对ＥＳ细胞基因转录调控起关键作用的调节因子。然而我们相信，随着研究工作的进一步开展，ＥＳ细胞基因转录调控机制的面纱将会逐步揭开，ＥＳ细胞在诸多领域
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文章编号：１０００－１３３６（２００６）０４－０３０８－０３
《生命的化学》２００６年２６卷４期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（４）
●ＲｅｃｅｎｔＰｒｏｇｒｅｓｓｅｓ
SIRT6：一个新的哺乳动物抗衰老因子
郭晓强张如春
（解放军白求恩军医学院生化教研室、基础医学教学实验中心，
石家庄０５００８１）
摘要：Ｓｉｒ２是一个在低等动物中被广泛研究的抗衰老蛋白因子。最新研究发现，哺乳动物Ｓｉｒ２的同源蛋白家族
Ｓｉｒｔｕｉｎ（ＳＩＲＴ）中的ＳＩＲＴ６在抗衰老过程中也发挥着重要作用，它的功能缺失将导致碱基切除修复（ＢＥＲ）受阻，
而出现细胞对氧化损伤的敏感性增加、皮肤变薄等衰老症状，使人们对哺乳动物的衰老机制有了初步的认识。关键词：
ＳＩＲＴ６；
Ｑ２６
哺乳动物；衰老
中图分类号：
衰老和死亡是任何物种中的个体都难以逃脱的最终结局，因此对衰老的研究一直是生命科学领域的最为基本和重要的问题之一，但细节一直知之甚少。自２０世纪８０年代开始，这种状况有了明显改观，以酵母、线虫、果蝇等低等动物为材料在分子水平上对衰老和长寿的机制进行了全面深入的研究并获得了巨大的成功。现在已经发现了与衰老有关的胰岛素信号通路（ｉｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌ
类似的过程，其中哺乳动物中存在着Ｓｉｒ２同源蛋
白家族Ｓｉｒｔｕｉｎ（ＳＩＲＴ）［３］，并且最新研究表明哺乳动物中的ＳＩＲＴ６在抑制衰老过程中也发挥着重要的作用［４］。
１．ＳＩＲＴ６的基本特征
Ｓｉｒ家族最早在酵母、线虫和果蝇等低等动物
中发现，随后研究发现高等动物中也普遍存在着其同源序列。２０００年，从哺乳动物方面鉴定与其同源的一个蛋白质家族，统一称为Ｓｉｒｔｕｉｎ，简写为ＳＩＲＴ。像小鼠、人等哺乳动物的ＳＩＲＴ家族都包含了７个成员，分别命名为ＳＩＲＴ１￣７［３］。根据氨基酸的同源性将ＳＩＲＴ分为了４种类型，其中
ｐａｔｈｗａｙ，ＩｎＳ）［１］、沉默信息调节蛋白（ｓｉｌｅｎｔｉｎｆｏｒ－ｍａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｏｒ，Ｓｉｒ）介导的抗衰老途径，其中的Ｓｉｒ２是研究得最为清楚的一种［２］。但相对于低等动
物，高等动物如小鼠、人等的衰老机制研究则落后许多，至今进展缓慢。由于高等动物整体结构复杂，因此衰老的分子机制也应该比较多样，但考虑到物种在进化上某种程度的保守性，低等生物衰老的一些基本机制在高等生物方面也应该有
———————————
收稿日期：作者简介：
２００６－０５－１２
郭晓强（１９７７—），男，硕士，助教，联系作者，
ＳＩＲＴ１￣３属于Ｉ类，该类型和Ｓｉｒ２的关系最为接
近，ＳＩＲＴ４属于ＩＩ类，ＳＩＲＴ５属于ＩＩＩ类，而ＳＩＲＴ６和７属于第ＩＶ类。相对于Ｉ类型，ＳＩＲＴ６与Ｓｉｒ２的同源性较差，如小鼠ＳＩＲＴ６与酵母Ｓｉｒ２的同源性只有２５％。这个初步结果说明，尽管存
在同源关系，但具体的作用机制可能存在一定的差异。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉａｏｑｉａｎｇｇｕｏ１２３＠１６３．ｃｏｍ
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
为人类造福的那一天也终将到来。
参
［１］
［８］［９］
ＬｅｅＴＩｅｔａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９８：７９９—８０４ＭｉｔｓｕｉＫｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００３，１１３：６３１—６４２
考文献
［１０］ＣｈａｍｂｅｒｓＩｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００３，１１３：６４３—６５５［１１］ＨｏｍｂｒｉａＪＣｅｔａｌ．ＣｕｒｒＢｉｏｌ，２００２，１６：Ｒ５６９—Ｒ５７５［１２］ＨｏｃｈｅｄｌｉｎｇｅｒＫｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００５，１２１：４６５—４７７［１３］ＳｉｍｏｎｓｓｏｎＳｅｔａｌ．ＮａｔＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００４，６：９８４—９９０［１４］ＧｒａｈａｍＶｅｔａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ，２００３，３９：７４９—７６５
［１５］ＲｏｄｄａＤＪｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００５，２８０：２４７３１—２４７３７［１６］ＢａｌｌａｓＮｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００５，１２１：６４５—６５７［１７］ＨｅＪｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００３，２７８：３０５４０—３０５４７
ＥｖａｎｓＭＪｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８１，２９２：１５４—１５６
［２］ＢｏｙｅｒＬＡｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００５，１２２：９４７—９５６［３］［４］［５］［６］［７］
ＬｅｗｉｓＢＰｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００５，１２０：１５—２０
ＫａｎｅｌｌｏｐｏｕｌｏｕＣｅｔａｌ．ＧｅｎｅｓＤｅｖ，２００５，１９：４８９—５０１ＰａｓｑｕｉｎｅｌｌｉＡＥｅｔａｌ．ＣｕｒｒＯｐｉｎＧｅｎｅｔＤｅｖ，２００５，１５：２００—２０５Ｓｈｅｎ－ＯｒｒＳＳｅｔａｌ．ＮａｔＧｅｎｅｔ，２００２，３１：６４—６８ＭａｎｇａｎＳｅｔａｌ．ＪＭｏｌＢｉｏｌ，２００３，３３４：１９７—２０４
●新进展
文章编号：１０００－１３３６（２００６）０４－０３０５－０４
《生命的化学》２００６年２６卷４期
ＣＨＥＭＩＳＴＲＹＯＦＬＩＦＥ２００６，２６（４）
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胚胎干细胞的基因转录调控
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何志颖桑杰陈宇
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上海２００４３３）
（第二军医大学细胞生物学教研室、１研究生管理大队学员二队，
摘要：胚胎干细胞作为一种具有多潜能性和自我更新能力的细胞，在人类等高等生物发育中占有重要地位；基
于这一特性，胚胎干细胞在临床上具有极其广阔的应用前景。转录因子ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ通过调节胚胎干细胞的基因转录，对其多潜能性和自我更新能力具有关键性的调控作用。对这一作用机制的研究，将对人类早期发育的了解和胚胎干细胞的临床应用具有积极意义。关键词：
胚胎干细胞；
ＯＣＴ４；ＳＯＸ２；ＮＡＮＯＧ
中图分类号：Ｑ２１
哺乳动物的发育均需由１个全能细胞分化形
成２００多种不同类型的细胞。从囊胚期内细胞群分离得到的胚胎干细胞（ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＥＳ
ｃｅｌｌ）在体外具有无限或较长期的自我更新能力，
并能在特定的诱导条件下分化为各种组织特异性细胞［１］。对人类ＥＳ细胞多潜能性和自我更新的转录调控体系进行研究，是了解人类早期发育和将
ＥＳ细胞成功应用于临床治疗的基础。大量针对这一调控体系的研究表明，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ这三个转录因子对ＥＳ细胞基因转录具有关键性的调控作用，可认为它们是保持ＥＳ细胞多潜能
性和自我更新的中心物质［２］。
ｍｉＲＮＡ的靶基因，而缺乏ｍｉＲＮＡ转录的ＥＳ细胞则不能进行分化［４］。此外，ｍｉＲＮＡ通过调控基因的表达在生物发育中也起到重要作用［５］。ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ被发现与１４个ｍｉＲＮＡ基因相关并至少共同调节ｍｉｒ－１３７和ｍｉｒ－３０１这两个ｍｉＲ－ＮＡ基因的表达。有实验结果提示［２］，这些涉及调控人类发育过程的ｍｉＲＮＡ基因都可能受ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的调节，而它们自身也是细胞基
因转录调控系统的重要组成部分之一。
１．ＯＣＴ４，ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的靶基因
有一组被称为ｍｉＲＮＡ（ｍｉｃｒｏＲＮＡ）的小型非编
码ＲＮＡ在基因转录中起着重要作用。最近的研究表明［３］，超过１／３的哺乳动物蛋白质编码基因是
———————————
收稿日期：
２００６－０５－１１
国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．３０２７０６０３）；上海市科委重大项目（Ｎｏ．０３ＤＪ１４０２０）
作者简介：
曹曙（１９８５—），男，汉族，本科生，Ｅ－ｍａｉｌ：
胡以平（１９５４—），男，教授，联系作者，
何志颖（１９７６—），男，博士，讲师，
Ｓｔｅｐｈｅｎ８５６１１＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ；
Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｐｈｕ＠ｓｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ；
Ｅ－ｍａｉｌ：ＺｈｉＹｉｎｇＨｅ２００２＠１６３．ｃｏｍ
Ｂｏｙｅｒ等［２］在基因组水平利用位置分析法，鉴
定出人类ＥＳ细胞中有６２３个（３％）蛋白质编码基因和５个（３％）ｍｉＲＮＡ基因的启动子与ＯＣＴ４关联。这些基因包括许多以往在小鼠ＥＳ细胞研究工作中所确定或假定的ＯＣＴ４靶基因，以及一些转录物被高度浓缩的基因，如ＳＯＸ２、ＮＡＮＯＧ、ＬＥＦＴＹ２／ＥＢＡＦ、ＣＤＸ２、ＨＡＮＤ１、ＤＰＰＡ４、ＧＪＡ１／ＣＯＮＮＥＸＩＮ４３、ＦＯＸＯ１Ａ、ＣＲＩＰＴＯ／ＴＤＧＦ１和ＺＩＣ３。
同时，还有许多蛋白质编码基因和ｍｉＲＮＡ基因是ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的靶基因［２］。人类ＥＳ细胞中，分别有１２７１个（７％）和１６５７个（９％）蛋白质编码基因的启动子与ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ相关。先前在小鼠ＥＳ细胞的研究表明，由于在启动子结合
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［１１］ｗｗｗ．ｂｉｏｃａｒｔａ．ｃｏｍ／ｐａｔｈｆｉｌｅｓ／ｈ＿ｃｈｒｅｂｐＰａｔｈｗａｙ．ａｓｐ
［１２］ＫａｂａｓｈｉｍａＴｅｔａｌ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２００３，１００（９）：
５１０７—５１１２
［１３］ＴｓａｔｓｏｓＮＧｅｔａｌ．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００６，３４０（２）：
４４９—４５６
［１４］ＬｉＭＶｅｔａｌ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２００６，５５（５）：１１７９—１１８９［１５］ＤｅｎｔｉｎＲｅｔａｌ．ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ，２００５，１１５（１０）：２８４３—２８５４［１６］
ＩｓｈｉｉＳｅｔａｌ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２００４，１０１：１５５９７—１５６０２
［１７］ＳｔｏｅｃｋｍａｎＡＫｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００４，２７９：１５６６２—１５６６９［１８］ＭａＬｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００５，２８０（１２）：１２０１９—１２０２７
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位点的并列关系，ＯＣＴ４和ＳＯＸ２可以协同诱导靶
基因的转录，而在人类ＥＳ细胞中，与ＯＣＴ４关联的靶基因启动子中大约有一半同时也与ＳＯＸ２相关。更令人惊讶的是，同时与ＯＣＴ４和ＳＯＸ２都相关的靶基因启动子中９０％以上也能与ＮＡＮＯＧ结合。最后经确定，至少有３５３个靶基因是
互联的自身调节网络来共同调控它们自身编码基因的转录。在小鼠ＥＳ细胞，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＮＡＮＯＧ的转录调控由ＯＣＴ４－ＳＯＸ２复合物完成，而且这３个转录因子的表达和功能是紧密相关的。这些基因调控机制在人类ＥＳ细胞也同样存在，而且ＮＡＮＯＧ也是这些基因调控机制的重要
组成部分。这种互联的自身调节网络被认为既可以缩短ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ对环境刺激的反应时间，又能增加其基因表达的稳定性［６，９］。
前馈系统和自身调节网络对ＥＳ细胞响应发育信号有重要意义。改变ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ三者共同拥有的，且３
个转录因子在这些基因启动子上的结合位点都相互接近。这提示在人类ＥＳ细胞，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＮＡＮＯＧ的靶基因有较大部分是由三者协同调节的（图１）。
ＮＡＮＯＧ的表达水平和功能状态，可以改变小鼠ＥＳ细胞的分化方向，这被认为是ＯＣＴ４和ＮＡＮＯＧ这两个基本调节器控制的信号传导通路
受到干扰的后果；而这两个基本调节器的表达水平和功能状态，与靶基因和它们自身编码基因的启动子均密切相关。这些因子相对量的改变，会干扰前馈系统和自身调节网络，改变细胞总量和细胞命运［９，１０］。
除了组成前２．２调节多条关键信号转导通路
馈系统和自身调节网络，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ进一步通过调节多条关键信号转导通路来调控许
图１
ＯＣＴ、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的靶基因［２］
多靶基因的转录，从而对ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新产生作用［２］。
在体内，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ会涉及到一些转录活性较高的基因。有研究表明［２］，一个或更多的ＥＳ细胞转录因子调控１３０３个这种转录活性较高的基因。ＥＳ细胞管家基因中，大约有一半是ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ共同的靶基因。这些基因中包括有编码参与信号转导通路Ｔｇｆ－β（如
２．ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的调节网络
研究表明［２］，２．１前馈系统和自身调节网络
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ对大量靶基因及其自身
编码基因的转录调控，主要是通过组成前馈系统和自身调节网络来实现的。由ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＮＡＮＯＧ组成的前馈系统，至少涉及到３５３个蛋白
质编码基因和２个ｍｉＲＮＡ基因。这个系统包括一
个控制着二级调节器的一级调节器，并能调节
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ共同拥有的大量靶基因。它有多重调节能力，这对于ＥＳ细胞而言是具有特殊意义的。当ＯＣＴ４和ＮＡＮＯＧ这两个基本调
节器都为正向调节时，前馈系统也会表现出与其水平一致但变化相对迟缓的活性［６］。而当调节器既有正向调节又有负向调节的时候，前馈系统则会通过一段缓冲时间来延迟或抵消上游调节器对下游调节器的调控从而发挥作用［７］。在ＥＳ“开关”细胞，这种多重调节能力对于其保持多潜能性的同时，又保持对分化信号作出恰当反应具有一定作用［８］。
此外，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ还通过组成
ＴＤＧＦ１、ＬＥＦＴＹ２／ＥＢＡＦ）和Ｗｎｔ（如ＤＫＫ１、ＦＲＡＴ２）
的蛋白质的基因。而信号转导通路Ｔｇｆ－β及Ｗｎｔ都将对保持ＥＳ细胞多潜能性和自我更新发挥作用。这提示，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ会通过诱导或阻遏ＴＤＧＦ１、ＬＥＦＴＹ２／ＥＢＡＦ、ＤＫＫ１、ＦＲＡＴ２、ＤＫＫ１和ＦＲＡＴ２的表达，来上调或下调Ｔｇｆ－β及Ｗｎｔ这两条关键信号转导通路，从而调控ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新作用。
此外，在这些由ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ共
同调控的转录活性较高的基因中，还包括有
ＳＴＡＴ３等转录因子的编码基因［２］。在小鼠ＥＳ细胞，ＳＴＡＴ３是调控自我更新功能的关键调节器，它所参与调控的ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３信号转导通路是与细
胞增殖分化有关的重要信号转导通路，
在小鼠发
●新进展
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育过程中起到重要作用［１１］。这提示，在人类ＥＳ细
胞中，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ也可能通过调节
在肠道组织细胞时，将诱导细胞迅速增殖，而当
ＳＴＡＴ３的表达来调控ＪＡＫ－ＳＴＡＴ３信号转导通路，
从而对细胞的增殖分化产生作用。
２．３阻遏低转录活性的基因ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ在体内也涉及到一些转录活性较低的基
因。在这些转录活性较低的基因中，Ｂｏｙｅｒ等［２］发现了一些被显著强化的转录因子编码基因，其中一部分还与生物发育有关。这部分基因编码的转录因子对ＥＳ细胞分化为内胚层、中胚层和外胚层细胞具有重要作用。此外，大约有一半受
ＯＣＴ４基因关闭时则出现相反的情况。已证实ＯＣＴ４的这种作用是通过其对ＤＮＡ去甲基作用的控制来实现的［１３］。ＳＯＸ２则通过自身的ＨＭＧ区域和ＯＣＴ４的ＰＯＵ区域来介导它与ＯＣＴ４之间的协
同作用，并在两者其他区域的参与之下实现对其靶基因的转录激活。另外，ＳＯＸ２还在中枢神经系统的发育中起作用，它可抑制中枢神经系统中成熟神经元的分化［１４］。又有研究表明［１５］，ＮＡＮＯＧ作用于维持ＥＳ细胞的多潜能性，而它的过表达则会导致ＥＳ细胞在接触分化诱导因子后仍保持多潜能性和自我更新，并不分化成其他细胞。
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ共同调控的转录因子是
低活性编码和转录的，而它们又是在生物发育过程中占据重要位置的同源结构域蛋白质。这说明
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ可以协同调控一组在生
物发育进程中起关键作用的可阻遏基因，从而调节生物的发育过程。
４．其他调节因子
ＥＳ细胞转录调控系统除了ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ这３个基本调节因子外，还有许多其他
调节因子参与其中。前面已经提到涉及人类ＥＳ细胞发育过程调控的ｍｉＲＮＡ基因在受ＯＣＴ４、
３．ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ的调控结果
作为一个协同作用的团队，ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和
ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ调控的同时，本身也是细胞基因
转录调控系统的重要组成部分。另外，一些受
ＮＡＮＯＧ通过它们共同组成的调控网络，诱导它
们自身的编码基因和编码关键信号转导通路组成部件的基因，并阻遏某些在发育过程中起关键作用的基因，从而调控ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新以及生物的早期发育［２］。
在保持ＥＳ细胞的基本特性和生物的早期发育中，ＯＣＴ４和ＮＡＮＯＧ被认为是两个基本调节器，而ＳＯＸ２则通过和ＯＣＴ４组成异二聚体发挥协同调控作用。三者的表达水平和功能状态，将直接对ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新乃至生物的早期发育产生影响。先前在小鼠ＥＳ细胞的研究表明［９，１１］，对ＯＣＴ４或ＮＡＮＯＧ的破坏将导致ＥＳ细胞不恰当的分化成滋养外胚层和胎膜内皮层，
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ调控的转录因子编码基因（ＲＥＳＴ、ＳＫＩＬ、ＨＥＳＸ１和ＳＴＡＴ３等）所编码的转
录因子自身，就可以调控某些特殊基因的转录。比如，在ＥＳ细胞中含量丰富的ＲＥＳＴ可以阻遏神经元特定基因的转录［１６］。ＳＫＩＬ则通过控制信号转导通路Ｔｇｆ－β的下游元件ＳＭＡＤ２和ＳＭＡＤ４来发挥对基因转录的调控作用［１７］。
５．结语
对ＥＳ细胞基因转录调控机制的研究，有助
于我们加深对细胞生物学、发育学以及人类健康的理解。了解这一作用机制将对我们控制细胞命运，及将ＥＳ细胞成功应用于组织修复和肿瘤治疗等临床领域产生积极作用。虽然我们已经清楚
ＯＣＴ４表达下降诱导ＥＳ细胞分化形成滋养外胚层，ＮＡＮＯＧ缺失则使ＥＳ细胞向体壁和内脏内胚层分化，而ＯＣＴ４表达增加引起ＥＳ细胞向原始内胚层和中胚层的分化；若ＮＡＮＯＧ表达正常或增加，则能维持ＥＳ细胞的多能性。Ｍｉｔｓｕｉ等［９］针对ＯＣＴ４与ＮＡＮＯＧ在ＥＳ细胞中的作用特点，提出
了它们可能在胚胎发育的不同阶段起作用。胚胎发育早期有两个阶段：比较早期的桑椹胚阶段和植入前的囊胚阶段。ＯＣＴ４在这两个阶段中都起作用，而ＮＡＮＯＧ则在第二个阶段中起关键作用。在人类ＥＳ细胞，ＯＣＴ４的表达可使其保持幼稚状态，不分化为组织特异细胞［１２］。当这种表达出现
ＯＣＴ４、ＳＯＸ２和ＮＡＮＯＧ作为基本调节因子，可
以诱导它们自身的编码基因和编码关键信号转导通路组成部件的基因，以及阻遏某些在发育过程中起关键作用的基因，从而调控ＥＳ细胞的多潜能性和自我更新以及生物的早期发育，但对ＥＳ细胞基因转录调控机制的探究仍有不少问题，如我们对这３个基本调节因子的具体作用原理仍不十分清楚，并且我们也无法确定除这３个基本调节因子之外，是否还存在其他对ＥＳ细胞基因转录调控起关键作用的调节因子。然而我们相信，随着研究工作的进一步开展，ＥＳ细胞基因转录调控机制的面纱将会逐步揭开，ＥＳ细胞在诸多领域
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文章编号：１０００－１３３６（２００６）０４－０３０８－０３
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SIRT6：一个新的哺乳动物抗衰老因子
郭晓强张如春
（解放军白求恩军医学院生化教研室、基础医学教学实验中心，
石家庄０５００８１）
摘要：Ｓｉｒ２是一个在低等动物中被广泛研究的抗衰老蛋白因子。最新研究发现，哺乳动物Ｓｉｒ２的同源蛋白家族
Ｓｉｒｔｕｉｎ（ＳＩＲＴ）中的ＳＩＲＴ６在抗衰老过程中也发挥着重要作用，它的功能缺失将导致碱基切除修复（ＢＥＲ）受阻，
而出现细胞对氧化损伤的敏感性增加、皮肤变薄等衰老症状，使人们对哺乳动物的衰老机制有了初步的认识。关键词：
ＳＩＲＴ６；
Ｑ２６
哺乳动物；衰老
中图分类号：
衰老和死亡是任何物种中的个体都难以逃脱的最终结局，因此对衰老的研究一直是生命科学领域的最为基本和重要的问题之一，但细节一直知之甚少。自２０世纪８０年代开始，这种状况有了明显改观，以酵母、线虫、果蝇等低等动物为材料在分子水平上对衰老和长寿的机制进行了全面深入的研究并获得了巨大的成功。现在已经发现了与衰老有关的胰岛素信号通路（ｉｎｓｕｌｉｎｓｉｇｎａｌ
类似的过程，其中哺乳动物中存在着Ｓｉｒ２同源蛋
白家族Ｓｉｒｔｕｉｎ（ＳＩＲＴ）［３］，并且最新研究表明哺乳动物中的ＳＩＲＴ６在抑制衰老过程中也发挥着重要的作用［４］。
１．ＳＩＲＴ６的基本特征
Ｓｉｒ家族最早在酵母、线虫和果蝇等低等动物
中发现，随后研究发现高等动物中也普遍存在着其同源序列。２０００年，从哺乳动物方面鉴定与其同源的一个蛋白质家族，统一称为Ｓｉｒｔｕｉｎ，简写为ＳＩＲＴ。像小鼠、人等哺乳动物的ＳＩＲＴ家族都包含了７个成员，分别命名为ＳＩＲＴ１￣７［３］。根据氨基酸的同源性将ＳＩＲＴ分为了４种类型，其中
ｐａｔｈｗａｙ，ＩｎＳ）［１］、沉默信息调节蛋白（ｓｉｌｅｎｔｉｎｆｏｒ－ｍａｔｉｏｎｒｅｇｕｌａｔｏｒ，Ｓｉｒ）介导的抗衰老途径，其中的Ｓｉｒ２是研究得最为清楚的一种［２］。但相对于低等动
物，高等动物如小鼠、人等的衰老机制研究则落后许多，至今进展缓慢。由于高等动物整体结构复杂，因此衰老的分子机制也应该比较多样，但考虑到物种在进化上某种程度的保守性，低等生物衰老的一些基本机制在高等生物方面也应该有
———————————
收稿日期：作者简介：
２００６－０５－１２
郭晓强（１９７７—），男，硕士，助教，联系作者，
ＳＩＲＴ１￣３属于Ｉ类，该类型和Ｓｉｒ２的关系最为接
近，ＳＩＲＴ４属于ＩＩ类，ＳＩＲＴ５属于ＩＩＩ类，而ＳＩＲＴ６和７属于第ＩＶ类。相对于Ｉ类型，ＳＩＲＴ６与Ｓｉｒ２的同源性较差，如小鼠ＳＩＲＴ６与酵母Ｓｉｒ２的同源性只有２５％。这个初步结果说明，尽管存
在同源关系，但具体的作用机制可能存在一定的差异。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉａｏｑｉａｎｇｇｕｏ１２３＠１６３．ｃｏｍ
""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""
为人类造福的那一天也终将到来。
参
［１］
［８］［９］
ＬｅｅＴＩｅｔａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９８：７９９—８０４ＭｉｔｓｕｉＫｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００３，１１３：６３１—６４２
考文献
［１０］ＣｈａｍｂｅｒｓＩｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００３，１１３：６４３—６５５［１１］ＨｏｍｂｒｉａＪＣｅｔａｌ．ＣｕｒｒＢｉｏｌ，２００２，１６：Ｒ５６９—Ｒ５７５［１２］ＨｏｃｈｅｄｌｉｎｇｅｒＫｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００５，１２１：４６５—４７７［１３］ＳｉｍｏｎｓｓｏｎＳｅｔａｌ．ＮａｔＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００４，６：９８４—９９０［１４］ＧｒａｈａｍＶｅｔａｌ．Ｎｅｕｒｏｎ，２００３，３９：７４９—７６５
［１５］ＲｏｄｄａＤＪｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００５，２８０：２４７３１—２４７３７［１６］ＢａｌｌａｓＮｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００５，１２１：６４５—６５７［１７］ＨｅＪｅｔａｌ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００３，２７８：３０５４０—３０５４７
ＥｖａｎｓＭＪｅｔａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，１９８１，２９２：１５４—１５６
［２］ＢｏｙｅｒＬＡｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００５，１２２：９４７—９５６［３］［４］［５］［６］［７］
ＬｅｗｉｓＢＰｅｔａｌ．Ｃｅｌｌ，２００５，１２０：１５—２０
ＫａｎｅｌｌｏｐｏｕｌｏｕＣｅｔａｌ．ＧｅｎｅｓＤｅｖ，２００５，１９：４８９—５０１ＰａｓｑｕｉｎｅｌｌｉＡＥｅｔａｌ．ＣｕｒｒＯｐｉｎＧｅｎｅｔＤｅｖ，２００５，１５：２００—２０５Ｓｈｅｎ－ＯｒｒＳＳｅｔａｌ．ＮａｔＧｅｎｅｔ，２００２，３１：６４—６８ＭａｎｇａｎＳｅｔａｌ．ＪＭｏｌＢｉｏｌ，２００３，３３４：１９７—２０４