432
中国卫生检验杂志2004年8月第14卷第4期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology2004 August 14 No 4
续表2
大豆异黄酮本低值加标量测定均值回收率%
染料木甙金雀异黄素
0.0298.0
50.0100.0100.0200.0
45.894.3393490
91.994.395.096.2
[3]BlairHC,JordanSE,PetersonTG,etal.Variableeffectoftyrosinekinase
RSD%
4.75.41.52.2
inhibitorsonavianosteoclasticactivityandreductionofbonelossino variectomizedrats[J].JCellBiochem,1996,60:1761.
[4]LigginsJ,BluckLJ,CowardWA,etal.Extrctionandquantificationof
daidzeinandgennisteininfood.AnaliticalBiochemistry[J],1998,264(1):1.
[5]FrankeAA,CusterLJ,WangW,etal.HPLCanalysisofisoflavonoidsand
otherphenolicagentsfromfoosandfromhumanfluids.ProcSocExpBiolMed[J],1998,217(3):263.
[6]FrankeAA,CusterLJ,CernaCM,etal.RapidHPLCanalysisofdietary
phytoestrogensfromlegumesandfromhumanurine.ProcSocExpBiolMed
[J],1995,208(1):18.
[7]BarnesS,CowardL,KirkM,etal.HPLC-Massspectrometryanalysisof
isoflavones.ProcSocExpBiolMed[J],1998,217(3):254.
[8]NurmiT,MazurW,HeinonnenS,etal.Isoflavonecontentofsoybasedsup
plements.JPharmBiomedAnal[J],2002,28(1):1.
[9]AussenacT,LacombeS,andDayd J.Quantificationofisoflavonesbycapil
laryzoneelectrophoresisinsoybeanseeds:effectsofvarietyandenviron ment.AmJClinNutr[J],1998,68(6suppl):1480.
[10]孙梅君,骆炼,史长颖,等.中国大豆制品中异黄酮含量测定分析
研究[J].食品与发酵工业,1999,26(5):14.
[11]常凤启,韩会新,陈贵茹,等.HPLC法测定食品中金雀异黄素[J].
中国食品卫生杂志,2003,15(6):500.
[12]RostagnoMA,PalmaM,BarrosoCG.Ultrasound-assistedextractionof
soyisoflavones[J].JChromatogrA,2003,1012(2):119.
(收稿日期:2003 09 10)
2.6 方法的精密度 对试样同时进行6次测定,结果见表3。
四种异黄酮测定结果的重现性均符合分析要求。
表3 方法的精密度结果( g/g)
异黄酮DaidzinDaidzein
123456平均值77.774.168.676.977.181.576.0
46.078.449.0
78.978.578.179.478.177.7
RSD%5.74.71.02.1
Gennistin45.844.248.946.147.743.0Genistein49.249.850.548.948.147.7
2.7实际样品测定 采用本方法对6份样品进行测定,检测结果表明,由于大豆异黄酮在常温状态下稳定,检测方法重现性好,与标示值相基本吻合。
参考文献
[1]MessinaM,PerskyV,SetchellKDR,etal.Soyintakeandcancerrisk:Are
viewoftheinvitroandinvivodata[J].NutrCancer,1994,21:113.[2]AndersonJW,JohnstoneBM,Cook-NewellME.Meta-analysisoftheef
fectsofsoyproteinintakeonserumlipids[J].NewEnglJMed,1995,332:276.
研究报告
文章编号 1004 8685(2004)04 432 02
茶叶中茶多糖的提取和测定方法
陈建国,胡欣,梅松
(浙江省医学科学院,杭州 310013)
摘 要 目的 建立一种简便、快速、灵敏的测定茶叶中茶多糖含量的方法。 方法 按醇析水提法,通过正交试验
获得茶多糖提取最佳条件,苯酚 硫酸法比色测定茶多糖含量。 结果 茶多糖吸收波长为490nm;线性范围为8~72 g/ml;重现性好,CV=0.956%(n=6);平均回收率为99.9%,CV=2.037%(n=6);不同茶叶样品茶多糖含量在1.292%~4 529%之间。 结论 该法简便、快速、稳定、灵敏,重现性好。茶叶越粗老茶多糖含量越高。
关键词 茶叶;茶多糖;提取;含量;测定方法Anewmethodforextractionanddeterminationoftea-polysaccharideinteaChenJianguo,HuXing,MeiSong.ZhejiangAcademyofMedicalSciences,Hangzhou310013,China
Abstract Objective Todevelopasimple,rapidandaccuratemethodfordeterminationoftea-polysaccharide(TPS)intea. Methods TPSwasextractedbyback-flowwithalcoholandwaterinthesamples.ThebestconditionforextractingTPSinteawasde terminedbyorthogonaltest.TheUVspectrophotometerwasusedtodeterminethecontentofTPSbyusingphenol-sulfuricacid. Re sults Thelinearragewas8-72mg/ml,repeatabilitywasgood(CV=0.956%,n=6)andtheaveragerecoverywas99.9%.Thecon tentofTPSindifferentteasampleswas1.292%-4.529%. Conclusions Thismethodissimple,rapidandaccurate.
Keywords Tea;Polysacchride;Extraction;Determination;Method 中图分类号 R151 文献标识码 A
茶多糖(Tea-polysaccharide,简称TPS)系茶叶中重要的生理活性成分,具有降血糖、降血脂、增强免疫力、降血压、减慢心率、增加冠脉流量、抗凝血、抗血栓和耐缺氧等功效[1-3],已
日益引起人们的关注。为了合理开发、利用茶叶资源,迫切需
要建立一种快速、灵敏,而又简单、易行的茶多糖含量测定方法,为此,我们进行了本研究。
中国卫生检验杂志2004年8月第14卷第4期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology2004 August 14 No 4 433
1 材料与试剂
1.1 材料
1.1.1 粗老茶 采自杭州近郊,炒青、龙井等均为市售,茶多糖样品由中国茶科所提供。
1.1.2 标准溶液配制 准确吸取宁波慈城生化试剂厂生产的浓度为1mg/ml的标准葡萄糖溶液4ml于100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀置4 冰箱备用。
1.1.3 80%苯酚溶液配制 分析纯苯酚在油浴上加热至182 蒸馏,取该馏分的苯酚80g加蒸馏水20g使之溶解,摇匀置棕色瓶中、4 冰箱可长期贮存备用。
1.1.4 6%苯酚溶液配制 临用前用80%苯酚溶液加蒸馏水稀释配制而成。1.1.5 浓硫酸、无水酒精 均为分析纯。
1.1.6 仪器设备 岛津UV-2100型紫外-可见光分光光度仪,水浴锅,回流提取装置,抽滤器等。2 方法与结果
2.1 茶多糖提取最佳条件选择 采用醇析水提法,按正交试验[4]进行提取最佳条件的选择(另文报道)。
2.2 茶多糖提取 按2.1获得的最佳提取条件进行。称取茶叶样品1g 30 水浴回流浸提1h 趁热抽滤 清洗2次 取滤渣50 水浴回流浸提1h 趁热抽滤 冷却,定容至500ml,备用。2.3 吸收波长的选择 精密吸取茶多糖提取液、茶多糖样品液和标准溶液各1ml,分别置20ml具塞试管中,依次加入6%苯酚溶液1.0ml、浓硫酸5.0ml,静置10min后摇匀,室温放置20min后在波长400~600nm之间进行扫描,测最大吸收峰,结果见图1。茶多糖提取液在490nm、茶多糖样品在488nm、标准液在490nm处有最大吸收峰,它们结果基本一致,故选择490nm为吸
收波长。
试验号样品C值( g)129.71 29.522 33
20.019.423.824.2
图1 茶多糖的吸收光谱
2.4 标准曲线的制备 精密吸取标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0 8、1.0、1.2、1.4、1.8ml置20ml具塞试管中,各加蒸馏水至2 0ml,依次加入6%苯酚溶液1.0ml、浓硫酸5.0ml,静置10min后摇匀,室温放置20min后在490nm波长下测光密度(A值),制作标准曲线,求得回归曲线方程:Y=4.763X-0.158(r=0 977,n=8)。
2.5 重现性实验 取茶叶样品1 0g各6份,按2 2醇析水提后定容至500ml,各取茶多糖提取液1ml同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,分别为0.207、0.208、0.204、0 205、0.203、0.207,求得变异系数CV=0.956%(n=6)。2.6 回收率试验 精密称取样品1、2、3各1g,均为2份;另称取相应样品各1g,再均加入标准品40 g,每组各2份。各样品、样品+标准品均按2.2方法提取处理后定容至500ml,各取1ml同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,并计
算茶多糖浓度C值,求回收率和CV值,结果见表1。
表1 回收率试验结果(%,n=6)
CV(%)
标准品加入量( g)样品+标准品C值( g)标准品回收量( g)回收率(%)平均回收率
40.069.940.2100.540.069.740.2100.5
40.040.040.040.0
60.460.462.663.4
40.441.038.839.2
101.0102.597.098.0
99.9
2.037
2.7 样品测定 分别取不同茶叶样品1.0g各2份(平行样品),按2.2醇析水提后均定容至500ml,各取茶多糖提取液1ml,同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,根据标准曲线回归方程换算成样品浓度(C样),按下列公式计算样品中茶多糖含量。 茶多糖含量%=C样( g) 标准浓度(C标, g) 样品稀释倍数 换算因子[5]
100%
取样品量(g) 106C样 40 500 0.9= 100%=1.8 C样%
1 10各样品测定结果见表2。
表2 不同茶叶样品中茶多糖含量(%)
样品茶多糖含量
粗老茶14.259
粗老茶24.156
陈等外龙井3.528
炒青2.815
普通绿茶1.292
72 g/ml,适于一般实验室进行茶多糖含量的测定。用该法对几种不同茶叶样品进行茶多糖测定结果可知,茶多糖含量在1.292~4.259之间,茶叶越粗老茶多糖含量越高,这与有关文
6]
献报道结果[3、基本一致。
参考文献
[1]陈建国.茶多糖的提取及其药理作用研究概况[J].中草药,2000,31(7):附6-7.
[2]清水岑夫. 茶 血糖降下作用 ![J].茶(日),1987,3:24-27.[3]汪东风,谢晓凤,王泽农,等.粗老茶中的多糖含量及其保健作用
[J].茶叶科学,1994,14(1):73-74.
[4]徐吉民主编.正交法在医药科研中的应用[M].北京:中国医药科技出版社,1987,216,130-140.
[5]张惟杰主编.复合多糖生化研究技术[M].上海:上海科技出版社,
1987:6-7.[6]傅博强,谢明勇,聂少平,等.茶叶中多糖含量的测定[J].食品科
学,2001,22(11):69-73.
(收稿日期:2004 03 04)
3 小结
本方法简单、稳定、快速、灵敏、重复性好,线性范围为8~
432
中国卫生检验杂志2004年8月第14卷第4期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology2004 August 14 No 4
续表2
大豆异黄酮本低值加标量测定均值回收率%
染料木甙金雀异黄素
0.0298.0
50.0100.0100.0200.0
45.894.3393490
91.994.395.096.2
[3]BlairHC,JordanSE,PetersonTG,etal.Variableeffectoftyrosinekinase
RSD%
4.75.41.52.2
inhibitorsonavianosteoclasticactivityandreductionofbonelossino variectomizedrats[J].JCellBiochem,1996,60:1761.
[4]LigginsJ,BluckLJ,CowardWA,etal.Extrctionandquantificationof
daidzeinandgennisteininfood.AnaliticalBiochemistry[J],1998,264(1):1.
[5]FrankeAA,CusterLJ,WangW,etal.HPLCanalysisofisoflavonoidsand
otherphenolicagentsfromfoosandfromhumanfluids.ProcSocExpBiolMed[J],1998,217(3):263.
[6]FrankeAA,CusterLJ,CernaCM,etal.RapidHPLCanalysisofdietary
phytoestrogensfromlegumesandfromhumanurine.ProcSocExpBiolMed
[J],1995,208(1):18.
[7]BarnesS,CowardL,KirkM,etal.HPLC-Massspectrometryanalysisof
isoflavones.ProcSocExpBiolMed[J],1998,217(3):254.
[8]NurmiT,MazurW,HeinonnenS,etal.Isoflavonecontentofsoybasedsup
plements.JPharmBiomedAnal[J],2002,28(1):1.
[9]AussenacT,LacombeS,andDayd J.Quantificationofisoflavonesbycapil
laryzoneelectrophoresisinsoybeanseeds:effectsofvarietyandenviron ment.AmJClinNutr[J],1998,68(6suppl):1480.
[10]孙梅君,骆炼,史长颖,等.中国大豆制品中异黄酮含量测定分析
研究[J].食品与发酵工业,1999,26(5):14.
[11]常凤启,韩会新,陈贵茹,等.HPLC法测定食品中金雀异黄素[J].
中国食品卫生杂志,2003,15(6):500.
[12]RostagnoMA,PalmaM,BarrosoCG.Ultrasound-assistedextractionof
soyisoflavones[J].JChromatogrA,2003,1012(2):119.
(收稿日期:2003 09 10)
2.6 方法的精密度 对试样同时进行6次测定,结果见表3。
四种异黄酮测定结果的重现性均符合分析要求。
表3 方法的精密度结果( g/g)
异黄酮DaidzinDaidzein
123456平均值77.774.168.676.977.181.576.0
46.078.449.0
78.978.578.179.478.177.7
RSD%5.74.71.02.1
Gennistin45.844.248.946.147.743.0Genistein49.249.850.548.948.147.7
2.7实际样品测定 采用本方法对6份样品进行测定,检测结果表明,由于大豆异黄酮在常温状态下稳定,检测方法重现性好,与标示值相基本吻合。
参考文献
[1]MessinaM,PerskyV,SetchellKDR,etal.Soyintakeandcancerrisk:Are
viewoftheinvitroandinvivodata[J].NutrCancer,1994,21:113.[2]AndersonJW,JohnstoneBM,Cook-NewellME.Meta-analysisoftheef
fectsofsoyproteinintakeonserumlipids[J].NewEnglJMed,1995,332:276.
研究报告
文章编号 1004 8685(2004)04 432 02
茶叶中茶多糖的提取和测定方法
陈建国,胡欣,梅松
(浙江省医学科学院,杭州 310013)
摘 要 目的 建立一种简便、快速、灵敏的测定茶叶中茶多糖含量的方法。 方法 按醇析水提法,通过正交试验
获得茶多糖提取最佳条件,苯酚 硫酸法比色测定茶多糖含量。 结果 茶多糖吸收波长为490nm;线性范围为8~72 g/ml;重现性好,CV=0.956%(n=6);平均回收率为99.9%,CV=2.037%(n=6);不同茶叶样品茶多糖含量在1.292%~4 529%之间。 结论 该法简便、快速、稳定、灵敏,重现性好。茶叶越粗老茶多糖含量越高。
关键词 茶叶;茶多糖;提取;含量;测定方法Anewmethodforextractionanddeterminationoftea-polysaccharideinteaChenJianguo,HuXing,MeiSong.ZhejiangAcademyofMedicalSciences,Hangzhou310013,China
Abstract Objective Todevelopasimple,rapidandaccuratemethodfordeterminationoftea-polysaccharide(TPS)intea. Methods TPSwasextractedbyback-flowwithalcoholandwaterinthesamples.ThebestconditionforextractingTPSinteawasde terminedbyorthogonaltest.TheUVspectrophotometerwasusedtodeterminethecontentofTPSbyusingphenol-sulfuricacid. Re sults Thelinearragewas8-72mg/ml,repeatabilitywasgood(CV=0.956%,n=6)andtheaveragerecoverywas99.9%.Thecon tentofTPSindifferentteasampleswas1.292%-4.529%. Conclusions Thismethodissimple,rapidandaccurate.
Keywords Tea;Polysacchride;Extraction;Determination;Method 中图分类号 R151 文献标识码 A
茶多糖(Tea-polysaccharide,简称TPS)系茶叶中重要的生理活性成分,具有降血糖、降血脂、增强免疫力、降血压、减慢心率、增加冠脉流量、抗凝血、抗血栓和耐缺氧等功效[1-3],已
日益引起人们的关注。为了合理开发、利用茶叶资源,迫切需
要建立一种快速、灵敏,而又简单、易行的茶多糖含量测定方法,为此,我们进行了本研究。
中国卫生检验杂志2004年8月第14卷第4期 ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology2004 August 14 No 4 433
1 材料与试剂
1.1 材料
1.1.1 粗老茶 采自杭州近郊,炒青、龙井等均为市售,茶多糖样品由中国茶科所提供。
1.1.2 标准溶液配制 准确吸取宁波慈城生化试剂厂生产的浓度为1mg/ml的标准葡萄糖溶液4ml于100ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,摇匀置4 冰箱备用。
1.1.3 80%苯酚溶液配制 分析纯苯酚在油浴上加热至182 蒸馏,取该馏分的苯酚80g加蒸馏水20g使之溶解,摇匀置棕色瓶中、4 冰箱可长期贮存备用。
1.1.4 6%苯酚溶液配制 临用前用80%苯酚溶液加蒸馏水稀释配制而成。1.1.5 浓硫酸、无水酒精 均为分析纯。
1.1.6 仪器设备 岛津UV-2100型紫外-可见光分光光度仪,水浴锅,回流提取装置,抽滤器等。2 方法与结果
2.1 茶多糖提取最佳条件选择 采用醇析水提法,按正交试验[4]进行提取最佳条件的选择(另文报道)。
2.2 茶多糖提取 按2.1获得的最佳提取条件进行。称取茶叶样品1g 30 水浴回流浸提1h 趁热抽滤 清洗2次 取滤渣50 水浴回流浸提1h 趁热抽滤 冷却,定容至500ml,备用。2.3 吸收波长的选择 精密吸取茶多糖提取液、茶多糖样品液和标准溶液各1ml,分别置20ml具塞试管中,依次加入6%苯酚溶液1.0ml、浓硫酸5.0ml,静置10min后摇匀,室温放置20min后在波长400~600nm之间进行扫描,测最大吸收峰,结果见图1。茶多糖提取液在490nm、茶多糖样品在488nm、标准液在490nm处有最大吸收峰,它们结果基本一致,故选择490nm为吸
收波长。
试验号样品C值( g)129.71 29.522 33
20.019.423.824.2
图1 茶多糖的吸收光谱
2.4 标准曲线的制备 精密吸取标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0 8、1.0、1.2、1.4、1.8ml置20ml具塞试管中,各加蒸馏水至2 0ml,依次加入6%苯酚溶液1.0ml、浓硫酸5.0ml,静置10min后摇匀,室温放置20min后在490nm波长下测光密度(A值),制作标准曲线,求得回归曲线方程:Y=4.763X-0.158(r=0 977,n=8)。
2.5 重现性实验 取茶叶样品1 0g各6份,按2 2醇析水提后定容至500ml,各取茶多糖提取液1ml同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,分别为0.207、0.208、0.204、0 205、0.203、0.207,求得变异系数CV=0.956%(n=6)。2.6 回收率试验 精密称取样品1、2、3各1g,均为2份;另称取相应样品各1g,再均加入标准品40 g,每组各2份。各样品、样品+标准品均按2.2方法提取处理后定容至500ml,各取1ml同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,并计
算茶多糖浓度C值,求回收率和CV值,结果见表1。
表1 回收率试验结果(%,n=6)
CV(%)
标准品加入量( g)样品+标准品C值( g)标准品回收量( g)回收率(%)平均回收率
40.069.940.2100.540.069.740.2100.5
40.040.040.040.0
60.460.462.663.4
40.441.038.839.2
101.0102.597.098.0
99.9
2.037
2.7 样品测定 分别取不同茶叶样品1.0g各2份(平行样品),按2.2醇析水提后均定容至500ml,各取茶多糖提取液1ml,同标准曲线制备操作步骤,在490nm波长下测A值,根据标准曲线回归方程换算成样品浓度(C样),按下列公式计算样品中茶多糖含量。 茶多糖含量%=C样( g) 标准浓度(C标, g) 样品稀释倍数 换算因子[5]
100%
取样品量(g) 106C样 40 500 0.9= 100%=1.8 C样%
1 10各样品测定结果见表2。
表2 不同茶叶样品中茶多糖含量(%)
样品茶多糖含量
粗老茶14.259
粗老茶24.156
陈等外龙井3.528
炒青2.815
普通绿茶1.292
72 g/ml,适于一般实验室进行茶多糖含量的测定。用该法对几种不同茶叶样品进行茶多糖测定结果可知,茶多糖含量在1.292~4.259之间,茶叶越粗老茶多糖含量越高,这与有关文
6]
献报道结果[3、基本一致。
参考文献
[1]陈建国.茶多糖的提取及其药理作用研究概况[J].中草药,2000,31(7):附6-7.
[2]清水岑夫. 茶 血糖降下作用 ![J].茶(日),1987,3:24-27.[3]汪东风,谢晓凤,王泽农,等.粗老茶中的多糖含量及其保健作用
[J].茶叶科学,1994,14(1):73-74.
[4]徐吉民主编.正交法在医药科研中的应用[M].北京:中国医药科技出版社,1987,216,130-140.
[5]张惟杰主编.复合多糖生化研究技术[M].上海:上海科技出版社,
1987:6-7.[6]傅博强,谢明勇,聂少平,等.茶叶中多糖含量的测定[J].食品科
学,2001,22(11):69-73.
(收稿日期:2004 03 04)
3 小结
本方法简单、稳定、快速、灵敏、重复性好,线性范围为8~