生化需氧量(BOD)说明书（有关实验部分）
国际智能安全压差法
生化需氧量(BOD)是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程中消耗的溶解氧。(BOD5) 是指样品放置在（20±1）℃的暗处培养5d±4h ，所消耗的溶解氧的含量。
对于某些地面水及大多数工业废水、生活污水，因含较多的有机物，需要保证降解过程在有足够溶解氧的条件下进行。其具体取样量及是否需要稀释可借助化学需氧量（CODCr ） 推算。一般BOD 量按化学需氧量（CODCr ）的60%计算大致的浓度范围。
对于不含或少含微生物的工业废水，在测定BOD 5 时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应接种经过驯化的微生物。
一、方法原理：
将预先选好量程，并按量程范围量好体积的水样倒入培养瓶，在主机上搅拌，并将主机和培养瓶放入（20±1）℃的培养箱中进行5天的培养，水样中的有机物经过生物氧化作用，消耗水中的溶解氧，放出二氧化碳气体，而二氧化碳气体又被瓶中吸收杯中的氢氧化钠吸收，造成瓶中存在压力差，压差被智能测试帽传送到主机，经微电脑计算，可直接换算出水中溶解氧减少的量，即生物降解过程消耗的溶解氧的含量BOD 5。这种方法摒弃了直接使用汞柱读取压差的方法，一方面消除了水银挥发对人体造成的危害，应一方面操作更加简便，智能，本机采用当前国际最先进的微电脑压力传感器，大大提高了准确度，拓宽了测量范围。
二、测定步骤：
1、水样的采集：
样品采集按照《地表水和污水监测技术规范》（HJ/T 91-2002标准）的相关规定执行。
采集的样品应充满并密封于棕色玻璃瓶中，样品量不小于1000 ml，在0～4℃的暗处运输和保存，并于12 h内尽快分析。24 h内不能分析，可冷冻保存（冷冻保存时避免样品瓶破裂），冷冻样品分析前需解冻、均质化和接种。冷冻样品可能会造成测值偏低的现象。
2、准备工作：
2.1试剂配制：
2.1.1 LH-B1(无机盐粉末) ：1瓶，将无机盐粉末溶解于300ml 实验用水中，摇匀。每升水样加3ml 。
2.1.2 LH-B2磷酸盐缓冲粉包；1瓶，将磷酸盐缓冲粉溶解于100ml 实验用水中，摇匀。每升水样加1ml 。
2.1.3菌种：可采用含有生活污河水、湖水，污水处理厂出水。也可用上次BOD 试验后的试液，过滤后使用。
2.1.4稀释水：每升水中加入无机盐溶液3ml 、磷酸缓冲溶液1ml ，菌种5`10ml，并混合均匀。用氢氧化钠调整稀释水的pH 应为7.2左右。
2.1.5丙烯基硫脲：固体：2g ，1瓶。丙烯基硫脲硝化抑制剂，ρ(C4H8N2S)= 1.0g/L：溶解0.20g 丙烯基硫脲（C4H8N2S ）于200ml 水中混合，4℃保存，此溶液可稳定保存14d 。需在每升试样中加入2 ml丙烯基硫脲硝化抑制剂。
2.1.6 R13010043 PH精密试纸 pH 5.5-9 每包有80条 包
2.1.7 氢氧化钠溶液：10%。
2.1.8 盐酸溶液：10%。
3、水样的预处理
（1）PH 值;
水样的pH 值若超出6.5—7.5 范围时，可将取来的水样，用滴管滴加盐酸或氢氧化钠溶液，加几滴，摇匀后，用玻璃棒沾一滴到精密PH 滤纸上，根据颜色变化，在色板上找出其对应的PH 值，反复几次，将水样PH 调节至7.2左右。此步骤在测试前不可省略，否则，水样中细菌无法繁殖，水样不能降解，会造成BOD 测量错误。
（2）温度：
在测定前将水样放置于恒温箱中，使其温度在20℃左右。以减少测量误差。
（3）溶解氧：
为保证水中溶解氧含量，应将水样降至20℃后，搅拌至少3分钟，以便使水样中溶解氧达到饱和。
（4）接种稀释：
当水样BOD 值大于1000时，可对水样用稀释水（2.1.4）进行稀释。
（5）除氯：
含有少量游离氯的水样，一般放置1—2h ，游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，除去。其加入量的计算方法是：取中和好的水样100mL ，加入1＋1 乙酸10mL ，10％（m/V） 碘化钾溶液1mL ，混匀。以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。根据亚硫酸钠标准溶液消耗的体积及其浓度，计算水样中所需加亚硫酸钠溶液的量。
（6）抑制硝化作用
测定一般水样的BOD 5时，硝化作用很不明显或根本不发生。但对于生物处理池出水，则含有大量硝化细菌。因此，在测定BOD 5 时也包括了部分含氮化合物的需氧量。对于这种水样，如只需测定有机物的需氧量，应加入硝化抑制剂，如丙烯基硫脲（ATU ，C4H2N2S ）等。
（7）含毒工业污水的测定：
含有苯酚、甲醛、重金属盐等能够抑制微生物活动的工业废水，一般的接种液不能很快繁殖，应加入经生物驯化的菌种。驯化方法为，取一瓶生活污水，每天去掉10%上清液，补充有毒工业废水。至少7天到10天即可。测定工业污水时，可加入经驯化的菌种代替普通菌种。做完试验后，将试液留作下次试验的菌种。
4、水样的测定：
1、预先打开培养箱开关，设定温度为20℃。
2、将培养瓶洗净，最好选用机械方法去除污垢，有条件的可选用超声波清洗机清洗。洗净后，甩净水分。待用。
3、预先估计被测样品的BOD 值，如无法估计，可借助化学需氧量（COD Cr ） 推算。一般BOD 量按化学需氧量（COD Cr ）的60%计算大致的浓度范围。根据水样个数及6个培养瓶，选择每个水样做几个平行样，再按下表用干净的量筒量取经过预处理的PH 在7.2左右的水样，通过漏斗转入培养瓶中。
4、将搅拌转子洗净，装入瓶中，密封杯装入少许氢氧化钠固体，在密封杯口上下部各套上一个密封垫圈，盖上智能测试帽，拧紧瓶子。使瓶子和测试帽均能和密封垫接触压紧，防止漏气。
5、将培养瓶放在主机上，将培养瓶测试帽与主机上相应的接口一一对应，用数据线连接。不要连错，否则数据将与瓶中水样不对应。将主机及测试瓶放于培养箱中，将主机通过适配器与培养箱中电源连接。培养瓶中转子开始工作，如有转动不好的，摇晃瓶子使其转动即可。
6、按设置键，依次设置样品个数、培养瓶体积，水样体积、稀释倍数、样品培养周期、培养温度延时、样品数据记录频率、样品数据打印频率等。设置时，首先按删除键删除原数据，再输入新数据，设置完成按确定键自动退回主
7、全部设置完成后，按取消键退回初始界面，按启动键，仪器自动计时，在设定的延时时间后，计时开始，开始本次实验。
8、仪器在实验过程中将按照设定的参数记录数据，并按照设定频率打印测量结果，系统默认打印频率为1次/天。
9、达到设定时间后，切断电源。将主机及培养瓶移出培养箱。
10、数据处理，仪器根据设定的取样量、稀释倍数等自动计算，直读浓度。用户只需将同一样品的平行样取平均值即为此水样的BOD 值。
表一：水样BOD 浓度及取样量（下表红字是WTW 的内容，但如果BOD 含量过高的话，担心水中溶解氧含量不够，再加上取样量小必然导致误差较大。哈希最大到700mg/l）
7、仪器的校准
7.1标准溶液的配制
葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C 6H 12O 6）和谷氨酸( HOOC-CH 2-CH 2-CHNH 2-COOH ) 在103℃干燥1h 后，各取150mg 溶于接种稀释水，并用接种稀释水稀释至1000ml 。此标准溶液浓度范围：180~230mg/l。
7.2仪器校准
取180ml 葡萄糖-谷氨酸标准溶液，按照BOD 5检测步骤操作，检测出BOD 浓度应在180mg/l-230mg/l之间。否
则需要检查接种水或实验过程是否存在问题，仪器使用是否存在问题。
注意事项：1、装瓶时，水样温度最好在20℃左右。不要偏差过大。
2、为保证水中溶解氧含量，应将水样鼓泡曝气1小时或将水样放于敞口烧杯中，用磁力搅拌器搅拌半小
时，以便使水样中溶解氧达到饱和。
3、样品取样量必须按照说明书要求进行，否则可能产生较大误差。如需接种的样品要先接种再测量。
4、每次实验前，必须保证培养瓶的洁净，否则会产生较大误差。
水样稀释：水样浓度超过4000mg/L，则需要稀释时，如果水样中含有生活污水，则可选用蒸馏水稀释水样，最终BOD 的结果为读数*稀释倍数，如果采用接种水进行稀释，则BOD 值= bod读数-接种液BOD*接种液所占比例 水样所占比例
生化需氧量(BOD)说明书（有关实验部分）
国际智能安全压差法
生化需氧量(BOD)是指在规定的条件下，微生物分解水中的某些可氧化的物质，特别是分解有机物的生物化学过程中消耗的溶解氧。(BOD5) 是指样品放置在（20±1）℃的暗处培养5d±4h ，所消耗的溶解氧的含量。
对于某些地面水及大多数工业废水、生活污水，因含较多的有机物，需要保证降解过程在有足够溶解氧的条件下进行。其具体取样量及是否需要稀释可借助化学需氧量（CODCr ） 推算。一般BOD 量按化学需氧量（CODCr ）的60%计算大致的浓度范围。
对于不含或少含微生物的工业废水，在测定BOD 5 时应进行接种，以引入能分解废水中有机物的微生物。当废水中存在难以被一般生活污水中的微生物以正常速度降解的有机物或含有剧毒物质时，应接种经过驯化的微生物。
一、方法原理：
将预先选好量程，并按量程范围量好体积的水样倒入培养瓶，在主机上搅拌，并将主机和培养瓶放入（20±1）℃的培养箱中进行5天的培养，水样中的有机物经过生物氧化作用，消耗水中的溶解氧，放出二氧化碳气体，而二氧化碳气体又被瓶中吸收杯中的氢氧化钠吸收，造成瓶中存在压力差，压差被智能测试帽传送到主机，经微电脑计算，可直接换算出水中溶解氧减少的量，即生物降解过程消耗的溶解氧的含量BOD 5。这种方法摒弃了直接使用汞柱读取压差的方法，一方面消除了水银挥发对人体造成的危害，应一方面操作更加简便，智能，本机采用当前国际最先进的微电脑压力传感器，大大提高了准确度，拓宽了测量范围。
二、测定步骤：
1、水样的采集：
样品采集按照《地表水和污水监测技术规范》（HJ/T 91-2002标准）的相关规定执行。
采集的样品应充满并密封于棕色玻璃瓶中，样品量不小于1000 ml，在0～4℃的暗处运输和保存，并于12 h内尽快分析。24 h内不能分析，可冷冻保存（冷冻保存时避免样品瓶破裂），冷冻样品分析前需解冻、均质化和接种。冷冻样品可能会造成测值偏低的现象。
2、准备工作：
2.1试剂配制：
2.1.1 LH-B1(无机盐粉末) ：1瓶，将无机盐粉末溶解于300ml 实验用水中，摇匀。每升水样加3ml 。
2.1.2 LH-B2磷酸盐缓冲粉包；1瓶，将磷酸盐缓冲粉溶解于100ml 实验用水中，摇匀。每升水样加1ml 。
2.1.3菌种：可采用含有生活污河水、湖水，污水处理厂出水。也可用上次BOD 试验后的试液，过滤后使用。
2.1.4稀释水：每升水中加入无机盐溶液3ml 、磷酸缓冲溶液1ml ，菌种5`10ml，并混合均匀。用氢氧化钠调整稀释水的pH 应为7.2左右。
2.1.5丙烯基硫脲：固体：2g ，1瓶。丙烯基硫脲硝化抑制剂，ρ(C4H8N2S)= 1.0g/L：溶解0.20g 丙烯基硫脲（C4H8N2S ）于200ml 水中混合，4℃保存，此溶液可稳定保存14d 。需在每升试样中加入2 ml丙烯基硫脲硝化抑制剂。
2.1.6 R13010043 PH精密试纸 pH 5.5-9 每包有80条 包
2.1.7 氢氧化钠溶液：10%。
2.1.8 盐酸溶液：10%。
3、水样的预处理
（1）PH 值;
水样的pH 值若超出6.5—7.5 范围时，可将取来的水样，用滴管滴加盐酸或氢氧化钠溶液，加几滴，摇匀后，用玻璃棒沾一滴到精密PH 滤纸上，根据颜色变化，在色板上找出其对应的PH 值，反复几次，将水样PH 调节至7.2左右。此步骤在测试前不可省略，否则，水样中细菌无法繁殖，水样不能降解，会造成BOD 测量错误。
（2）温度：
在测定前将水样放置于恒温箱中，使其温度在20℃左右。以减少测量误差。
（3）溶解氧：
为保证水中溶解氧含量，应将水样降至20℃后，搅拌至少3分钟，以便使水样中溶解氧达到饱和。
（4）接种稀释：
当水样BOD 值大于1000时，可对水样用稀释水（2.1.4）进行稀释。
（5）除氯：
含有少量游离氯的水样，一般放置1—2h ，游离氯即可消失。对于游离氯在短时间不能消散的水样，可加入亚硫酸钠溶液，除去。其加入量的计算方法是：取中和好的水样100mL ，加入1＋1 乙酸10mL ，10％（m/V） 碘化钾溶液1mL ，混匀。以淀粉溶液为指示剂，用亚硫酸钠标准溶液滴定游离碘。根据亚硫酸钠标准溶液消耗的体积及其浓度，计算水样中所需加亚硫酸钠溶液的量。
（6）抑制硝化作用
测定一般水样的BOD 5时，硝化作用很不明显或根本不发生。但对于生物处理池出水，则含有大量硝化细菌。因此，在测定BOD 5 时也包括了部分含氮化合物的需氧量。对于这种水样，如只需测定有机物的需氧量，应加入硝化抑制剂，如丙烯基硫脲（ATU ，C4H2N2S ）等。
（7）含毒工业污水的测定：
含有苯酚、甲醛、重金属盐等能够抑制微生物活动的工业废水，一般的接种液不能很快繁殖，应加入经生物驯化的菌种。驯化方法为，取一瓶生活污水，每天去掉10%上清液，补充有毒工业废水。至少7天到10天即可。测定工业污水时，可加入经驯化的菌种代替普通菌种。做完试验后，将试液留作下次试验的菌种。
4、水样的测定：
1、预先打开培养箱开关，设定温度为20℃。
2、将培养瓶洗净，最好选用机械方法去除污垢，有条件的可选用超声波清洗机清洗。洗净后，甩净水分。待用。
3、预先估计被测样品的BOD 值，如无法估计，可借助化学需氧量（COD Cr ） 推算。一般BOD 量按化学需氧量（COD Cr ）的60%计算大致的浓度范围。根据水样个数及6个培养瓶，选择每个水样做几个平行样，再按下表用干净的量筒量取经过预处理的PH 在7.2左右的水样，通过漏斗转入培养瓶中。
4、将搅拌转子洗净，装入瓶中，密封杯装入少许氢氧化钠固体，在密封杯口上下部各套上一个密封垫圈，盖上智能测试帽，拧紧瓶子。使瓶子和测试帽均能和密封垫接触压紧，防止漏气。
5、将培养瓶放在主机上，将培养瓶测试帽与主机上相应的接口一一对应，用数据线连接。不要连错，否则数据将与瓶中水样不对应。将主机及测试瓶放于培养箱中，将主机通过适配器与培养箱中电源连接。培养瓶中转子开始工作，如有转动不好的，摇晃瓶子使其转动即可。
6、按设置键，依次设置样品个数、培养瓶体积，水样体积、稀释倍数、样品培养周期、培养温度延时、样品数据记录频率、样品数据打印频率等。设置时，首先按删除键删除原数据，再输入新数据，设置完成按确定键自动退回主
7、全部设置完成后，按取消键退回初始界面，按启动键，仪器自动计时，在设定的延时时间后，计时开始，开始本次实验。
8、仪器在实验过程中将按照设定的参数记录数据，并按照设定频率打印测量结果，系统默认打印频率为1次/天。
9、达到设定时间后，切断电源。将主机及培养瓶移出培养箱。
10、数据处理，仪器根据设定的取样量、稀释倍数等自动计算，直读浓度。用户只需将同一样品的平行样取平均值即为此水样的BOD 值。
表一：水样BOD 浓度及取样量（下表红字是WTW 的内容，但如果BOD 含量过高的话，担心水中溶解氧含量不够，再加上取样量小必然导致误差较大。哈希最大到700mg/l）
7、仪器的校准
7.1标准溶液的配制
葡萄糖-谷氨酸标准溶液：将葡萄糖（C 6H 12O 6）和谷氨酸( HOOC-CH 2-CH 2-CHNH 2-COOH ) 在103℃干燥1h 后，各取150mg 溶于接种稀释水，并用接种稀释水稀释至1000ml 。此标准溶液浓度范围：180~230mg/l。
7.2仪器校准
取180ml 葡萄糖-谷氨酸标准溶液，按照BOD 5检测步骤操作，检测出BOD 浓度应在180mg/l-230mg/l之间。否
则需要检查接种水或实验过程是否存在问题，仪器使用是否存在问题。
注意事项：1、装瓶时，水样温度最好在20℃左右。不要偏差过大。
2、为保证水中溶解氧含量，应将水样鼓泡曝气1小时或将水样放于敞口烧杯中，用磁力搅拌器搅拌半小
时，以便使水样中溶解氧达到饱和。
3、样品取样量必须按照说明书要求进行，否则可能产生较大误差。如需接种的样品要先接种再测量。
4、每次实验前，必须保证培养瓶的洁净，否则会产生较大误差。
水样稀释：水样浓度超过4000mg/L，则需要稀释时，如果水样中含有生活污水，则可选用蒸馏水稀释水样，最终BOD 的结果为读数*稀释倍数，如果采用接种水进行稀释，则BOD 值= bod读数-接种液BOD*接种液所占比例 水样所占比例