四川利君精华药业有限责任公司GMP 管理文件
1 目的：建立色谱柱使用维修保养操作规程，保证色谱柱正确使用，延长色谱柱使用寿命，节约耗材，保障检测结果准确可靠。
2 范围：适用于质检室气相及液相所使用的色谱柱。 3 职责：
3.1 QC：负责执行。 3.2 QC主任：负责检查。 3.3 质量部经理：负责监督。
4 依据：《药品生产质量管理规范》（2010年修订）。 5 内容：
5.1 色谱柱的安装
5.1.1 色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动。
5.1.2 当色谱柱和色谱仪连结时，配件（阀件、管路）一定要清洗干净，否则可能出现无名峰。
5.1.3 当色谱柱与进样阀、检测器连结时，不要用力过大，以免压紧螺丝折断或变形，以不漏为宜。
5.1.4 进样与色谱柱、柱出口与检测器之间的连续管路要尽可能细而短，以减少色谱柱系统的死体积，改善色谱峰形。
5.2 色谱柱的使用 5.2.1 溶剂
建议使用新配制的流动相。配制缓冲溶液时，须过滤之后再使用。应特别注意检查溶
剂与缓冲液的互溶性，采用梯度洗脱时尤其要注意。甲醇浓度的增大可使磷酸盐沉析，即使磷酸盐浓度很低也会沉析。沉析的盐会堵塞色谱柱，损坏进样阀和柱内填料。许多液相色谱流动相是可燃或有毒的，要防止色谱柱系统的泄露。
5.2.2 流向
色谱的标签上标明了流动相的流动方向，一般不宜反向使用，只是清洗色谱柱入口污染物时，可将色谱柱反向冲洗，但这是以损失部分柱效为代价的。
5.2.3 柱压
分析柱最大承受压力为400kg/cm2。使用低粘度流动相时，工作压力应小于200kg/cm2。柱压降主发取决于流动相粘度及流速。
5.2.4 柱性能
一般以每米理论板数表示柱效，每支成品柱均应附有打印的评价报告，标有评价时所用的条件、样品及柱效。建议每隔一段时间，根据报告单给定的条件测试柱性能，以鉴别色谱柱效的变化。
5.2.5 PH值
以硅胶为基质的种种健合固定相对酸和碱很敏感，正常条件PH 的使用范围为2.5～7.5。
5.2.6 进样
进新样品前，要先进一针流动相（即做一下进样动作），看是否有上次样品残留。要严格控制进样量，以免超负荷影响分离工作的进行。
5.3 色谱柱的保养 5.3.1 换溶剂
由油溶性溶剂如正已烷换成水溶性溶剂如甲醇时，要泵入两性溶剂二氯甲烷或异丙醇过渡一下。
5.3.2 样品提取
样品最好要用溶剂萃取法、吸附法、膜过渡法等提纯。 5.3.3 清洗进样阀
每天分析工作结束后，要洗去阀件中残留的样品，以免时间过长污染色谱柱，或一种
样品分析结束后，在换新样品前要洗去阀件中上次残留的样品，以免积液效应影响新样品的分离。
5.3.4 清洗色谱柱
如用一定酸碱度的缓冲液或盐溶液为流动相时，每天用完后要用纯水冲洗色谱柱，直到流出液为中性或无盐离子为止。如果分析的样品吸附性较强或含有溶解较差的，这类样品分析工作结束后，换新样品前最好修一下柱头，清洗或更换烧结不锈钢滤片，以免影响新样品的分析效果。
5.3.5 禁止拆卸色谱柱
色谱柱不论何时都不能拆卸下接头，以免损失柱效，废掉色谱柱。 5.4 色谱柱的贮存： 5.4.1 反相柱
如C189C9等，首先用二次蒸馏水冲洗，除去柱中残留的缓冲液和盐，再用10～20倍柱体积的甲醇--水（80：20）冲洗。
5.4.2 正相柱
如硅胶和氰基柱，先用异丙醇冲洗柱内残留物，再用干燥的已烷冲洗（注意：保存时一定要将柱结头封紧，以防止贮存中柱内溶剂的挥发）。
5.5 色谱柱的维修
色谱柱使用一段时间后，会发生柱压上升，柱效降低的现象。这主要是由于在柱床上端或过滤片处积累了污染物，可通过再生予以消除。如色谱柱性能突然变坏，可采取如下方法处理。
5.5.1 如果柱压增大，可将色谱柱出、入口颠倒过来，用10～20倍柱体积的流动相冲洗。如果柱压仍然很高，可能是柱入口处的过滤片堵塞，需要更换新滤片。
5.5.2 如果峰形变坏（如出现肩峰）。表明柱入口柱床可能有塌陷，可用同型号填料和流动相配成匀浆，将塌陷处填平。
5.6 色谱柱的再生：
5.6.1 正相柱按极性增大的顺序，依次用20～30倍柱体积的正已烷、二氯甲烷或异丙醇冲洗色谱柱。然后，再反顺序冲洗，最后用干燥的正已烷平衡。
5.6.2 反相柱
首先用二次蒸馏水冲洗，再分别用20～30倍柱体积的甲醇和二氯甲烷冲洗。然后反顺序冲洗，最后用流动相平衡。
5.6.3 离子交换柱
在低离子强度的缓冲液中长期使用会导致色谱柱失活。用稀酸缓冲液冲洗可使阳离子交换柱再生，再用碱性缓冲液冲洗可使阴离子柱再生。
5.6.4 氨基柱
分析糖的氨基柱可用20mol/L的磺酸冲洗，然后用水平衡。
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1 目的：建立色谱柱使用维修保养操作规程，保证色谱柱正确使用，延长色谱柱使用寿命，节约耗材，保障检测结果准确可靠。
2 范围：适用于质检室气相及液相所使用的色谱柱。 3 职责：
3.1 QC：负责执行。 3.2 QC主任：负责检查。 3.3 质量部经理：负责监督。
4 依据：《药品生产质量管理规范》（2010年修订）。 5 内容：
5.1 色谱柱的安装
5.1.1 色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动。
5.1.2 当色谱柱和色谱仪连结时，配件（阀件、管路）一定要清洗干净，否则可能出现无名峰。
5.1.3 当色谱柱与进样阀、检测器连结时，不要用力过大，以免压紧螺丝折断或变形，以不漏为宜。
5.1.4 进样与色谱柱、柱出口与检测器之间的连续管路要尽可能细而短，以减少色谱柱系统的死体积，改善色谱峰形。
5.2 色谱柱的使用 5.2.1 溶剂
建议使用新配制的流动相。配制缓冲溶液时，须过滤之后再使用。应特别注意检查溶
剂与缓冲液的互溶性，采用梯度洗脱时尤其要注意。甲醇浓度的增大可使磷酸盐沉析，即使磷酸盐浓度很低也会沉析。沉析的盐会堵塞色谱柱，损坏进样阀和柱内填料。许多液相色谱流动相是可燃或有毒的，要防止色谱柱系统的泄露。
5.2.2 流向
色谱的标签上标明了流动相的流动方向，一般不宜反向使用，只是清洗色谱柱入口污染物时，可将色谱柱反向冲洗，但这是以损失部分柱效为代价的。
5.2.3 柱压
分析柱最大承受压力为400kg/cm2。使用低粘度流动相时，工作压力应小于200kg/cm2。柱压降主发取决于流动相粘度及流速。
5.2.4 柱性能
一般以每米理论板数表示柱效，每支成品柱均应附有打印的评价报告，标有评价时所用的条件、样品及柱效。建议每隔一段时间，根据报告单给定的条件测试柱性能，以鉴别色谱柱效的变化。
5.2.5 PH值
以硅胶为基质的种种健合固定相对酸和碱很敏感，正常条件PH 的使用范围为2.5～7.5。
5.2.6 进样
进新样品前，要先进一针流动相（即做一下进样动作），看是否有上次样品残留。要严格控制进样量，以免超负荷影响分离工作的进行。
5.3 色谱柱的保养 5.3.1 换溶剂
由油溶性溶剂如正已烷换成水溶性溶剂如甲醇时，要泵入两性溶剂二氯甲烷或异丙醇过渡一下。
5.3.2 样品提取
样品最好要用溶剂萃取法、吸附法、膜过渡法等提纯。 5.3.3 清洗进样阀
每天分析工作结束后，要洗去阀件中残留的样品，以免时间过长污染色谱柱，或一种
样品分析结束后，在换新样品前要洗去阀件中上次残留的样品，以免积液效应影响新样品的分离。
5.3.4 清洗色谱柱
如用一定酸碱度的缓冲液或盐溶液为流动相时，每天用完后要用纯水冲洗色谱柱，直到流出液为中性或无盐离子为止。如果分析的样品吸附性较强或含有溶解较差的，这类样品分析工作结束后，换新样品前最好修一下柱头，清洗或更换烧结不锈钢滤片，以免影响新样品的分析效果。
5.3.5 禁止拆卸色谱柱
色谱柱不论何时都不能拆卸下接头，以免损失柱效，废掉色谱柱。 5.4 色谱柱的贮存： 5.4.1 反相柱
如C189C9等，首先用二次蒸馏水冲洗，除去柱中残留的缓冲液和盐，再用10～20倍柱体积的甲醇--水（80：20）冲洗。
5.4.2 正相柱
如硅胶和氰基柱，先用异丙醇冲洗柱内残留物，再用干燥的已烷冲洗（注意：保存时一定要将柱结头封紧，以防止贮存中柱内溶剂的挥发）。
5.5 色谱柱的维修
色谱柱使用一段时间后，会发生柱压上升，柱效降低的现象。这主要是由于在柱床上端或过滤片处积累了污染物，可通过再生予以消除。如色谱柱性能突然变坏，可采取如下方法处理。
5.5.1 如果柱压增大，可将色谱柱出、入口颠倒过来，用10～20倍柱体积的流动相冲洗。如果柱压仍然很高，可能是柱入口处的过滤片堵塞，需要更换新滤片。
5.5.2 如果峰形变坏（如出现肩峰）。表明柱入口柱床可能有塌陷，可用同型号填料和流动相配成匀浆，将塌陷处填平。
5.6 色谱柱的再生：
5.6.1 正相柱按极性增大的顺序，依次用20～30倍柱体积的正已烷、二氯甲烷或异丙醇冲洗色谱柱。然后，再反顺序冲洗，最后用干燥的正已烷平衡。
5.6.2 反相柱
首先用二次蒸馏水冲洗，再分别用20～30倍柱体积的甲醇和二氯甲烷冲洗。然后反顺序冲洗，最后用流动相平衡。
5.6.3 离子交换柱
在低离子强度的缓冲液中长期使用会导致色谱柱失活。用稀酸缓冲液冲洗可使阳离子交换柱再生，再用碱性缓冲液冲洗可使阴离子柱再生。
5.6.4 氨基柱
分析糖的氨基柱可用20mol/L的磺酸冲洗，然后用水平衡。