第42卷第10农药
期(2003)
27
多杀菌素的高效液相色谱
法测定
张苑,金志华,林建平,岑沛霖
(浙江大学材料与化工学院生物工程研究所,杭州310027)
摘 要 采用高效液相色谱法对Saccharpolysporaspinasa发酵液中多杀菌素含量进行测定,本方法的相对标准偏差为0.11%,变异系数为0.15%,线性相关系数为0.99916,平均回收率为
96.94%。
关键词 多杀菌素 高效液相色谱 分析
多杀菌素是由刺糖多孢菌(Saccharpolysporaspinasa)
1,2〕
产生的大环内酯类生物杀虫剂〔。它具有高效、低毒、对
溶液、标准溶液的顺序进行高效液相色谱分析。采用外标法对样品进行定量分析,多杀菌素含量(L)按下列公式进行计算:
=
2
环境友好等优点,是一种绿色广谱杀虫剂,兼具生物农药的安全性和化学合成农药的快速效果〔3,4〕。本文采用高效液相色谱法对S.spinosa发酵液中多杀菌素含量进行了定量分析,该方法快速、准确、重复性好,素含量的测定,1 仪器和试剂1.1 仪器
Agilend1100高效液相色谱仪;pH计PHS-25数显(0.01级)(上海雷磁精密仪器厂);电子天平(BP190SMax200gd=0.1mg);台式离心机TDL80-2B(上海安亭科学仪器
2P为标样中多杀菌素的含量(mg/L)
4 结果与讨论4.1 色谱条件的确定
5,6〕
据文献报道〔和实验对比筛选,确定了检测波长、流
动相配比、
色谱柱、流速等条件。在此条件下能快速、灵敏、准确地进行定量分析,标样和发酵液样品的HPLC图见图1和图2。
μm,天津自动科学厂);超声波清洗器;微孔滤膜(F型0.45仪器公司)。
1.2 试剂
甲醇(色谱纯,上海化学试剂研究所);乙腈(色谱纯,中国医药集团上海化学试剂公司);超滤水(自制);多杀菌素标准品(含量≥99%)。
2 色谱工作条件
μm,250×色谱柱:Agilend0213Nucleosil100-5C185
4.0mm;检测器:紫外光度检测器,波长250nm;流动相:甲醇/乙腈/水=45/45/10(v/v),含有0.05%的乙酸钠;流速:1.
(
多杀菌素A的出峰时间为9.389min,
μ0ml/min;进样量:20l;柱温:室温。
3 实验方法3.1 标准溶液的配制
多杀菌素D的出峰时间为10.940min)图1 多杀菌素标样高效液相色谱图
准确称取多杀菌素标样0.025g,加入10ml甲醇,并反μm的滤纸过复振荡,使标样完全溶解,离心,上清液用0.45滤,即可用于HPLC测定。
3.2 试样溶液的配制
取10ml发酵液样离心,弃去上清液,向沉淀中添加
10ml甲醇,并反复振荡,使多杀菌素完全溶解。再次离心,
μm的滤纸过滤上清液,即可用于HPLC测定。用0.45
3.3 测定方法
在上述色谱工作条件下,待仪器基线稳定后,连续注入数针标准溶液,计算各针相对响应值的重复性,待相邻两针的响应值变化小于1.5%后,按照标准溶液、样品溶液、样品
(多杀菌素A的出峰时间为9.403min,
多杀菌素D的出峰时间为10.972min)图2 多杀菌素发酵液高效液相色谱图
28
4.2 分析方法的线性相关性测定
PESTICIDES Vol142 No110 (2003)
〔1〕 KirstHA,MichelKH,MynderseJS,etal.Discovery,isolation,
andstructureelucidationofafamilyofstructurallyunique,fer2mentation-derivedtetracyclicmacrolides.In:BakerDR,FenyesJG,SteffensJJ,(Eds.)SynthesisandChemistryofAgrochemi2cals,AmericanChemicalSociety,WashingtonDC,1992.214-225
多杀菌素标准品分别配制成50、125、250、500、1000、
1250mg/L六种不同浓度的标准溶液,在要求的色谱条件下
进行相同体积的进样,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标作图可得一直线(图3),考察峰面积Area(mAU3min)与浓度
Amt(mg/L)的关系。从图3得到多杀菌素HPLC分析法的
〔2〕 NakatsukasaWM,BoeckL,OccolowitzJL,etal.A83543A-D,uniquefermentation-derivedtetracyclicmacrolides.Tetrahed2tonLett.,1991,32:4839-4842
回归方程Area=15.4813Amt+321.7,相关系数r=
0.99916。多杀菌素浓度在50～1250mg/L范围内,峰面积
〔3〕 CrouseGD,SparksTC.Naturallyderivedmaterialsasproducts
andleadsforinsectcontrol:thespinosyns.Rev.Toxicol.,1998,2:133-146
与多杀菌素浓度之间都有良好的线性相关性。
〔4〕 吴霞1多杀菌素———以天然产物开发新农药的范例1世界农
药,2001,23(1):24-28
〔5〕 WestSD,TurnerLG.spinosynsandits
citruscommoditiesby,2000,48(2):,LT,TurnerLG,etal.Determinationof
spinosynsanditsmetabolitesinfoodandenvironmentalmatrices.
图3 4.3 分析方法的精密度测定
1.High-performanceliquidchromatographywithultravioletde2tection.J.Agric.Food.Chem.,2000,48(11):5131-5137
DeterminationofSpinosynsbyHPLC
ZhangYuan,JinZhihua,LinJianping,CenPeilin
(InstituteofBioengineering,CollegeofMaterialsScienceandChemicalEngineering,ZhejiangUniversity,Hangzhou310027,China)
Abstract:QuantitativeanalysisofspinosynsbyHPLCwithNucleosilC18columnatUV250nmwasintroduced.Theresultshowsthattherelativestandarddeviation,thecoefficientsofvariation,thelinearcorre2lationandtheaveragerecoverywere0.11%,0.15%,0.99916and96.94%respectively.
Keywords:spinosyns,HPLC,analysis.
以处理好的发酵液为样品,用本方法进行六次重复测定,结果多杀菌素HPLC分析法的相对偏差为0.11%,变异系数为0.15%,说明本方法的重复性良好。
4.4 分析方法的准确度测定
采用标准添加法,在已知含量的样品中添加一定量的已知标准品,在上述液相色谱条件下进行6次重复测定,测得平均回收率为96.94%。
参考文献
收稿日期:200211217
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《河北化工》为化工综合性技术期刊,由河北省化学
工业研究院和河北省化学工业技术情报中心站主办,国内外公开发行,国内统一刊号CN13-1058/TQ,国际标准刊号ISSN1003-5096。本刊为大16开64页码,双月刊,逢双月20日出版。国内订价8.50元/本,全年51元(含邮寄费)。邮发代号18-333。国内可通过全国各地邮局征订或直接向编辑部汇款订阅。
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2004年《中国化学化工文摘》征订启事
《中国化学化工文摘》是中国化工信息中心主办的针
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近年来,本刊不断加大对化学化工期刊及高校学报的报道力度;合并了原《化工科技资料目录》;增加了对国内化工图书、会议文献及高校硕博士论文的报道;并以分册的形式报道国内化工专利。
《中国化学化工文摘》为月刊(另附主题、作者索引),大16开本,年订价360元。刊号CN11-3163/TQ,ISSN1004-8235。本刊自办发行。
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第42卷第10农药
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27
多杀菌素的高效液相色谱
法测定
张苑,金志华,林建平,岑沛霖
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摘 要 采用高效液相色谱法对Saccharpolysporaspinasa发酵液中多杀菌素含量进行测定,本方法的相对标准偏差为0.11%,变异系数为0.15%,线性相关系数为0.99916,平均回收率为
96.94%。
关键词 多杀菌素 高效液相色谱 分析
多杀菌素是由刺糖多孢菌(Saccharpolysporaspinasa)
1,2〕
产生的大环内酯类生物杀虫剂〔。它具有高效、低毒、对
溶液、标准溶液的顺序进行高效液相色谱分析。采用外标法对样品进行定量分析,多杀菌素含量(L)按下列公式进行计算:
=
2
环境友好等优点,是一种绿色广谱杀虫剂,兼具生物农药的安全性和化学合成农药的快速效果〔3,4〕。本文采用高效液相色谱法对S.spinosa发酵液中多杀菌素含量进行了定量分析,该方法快速、准确、重复性好,素含量的测定,1 仪器和试剂1.1 仪器
Agilend1100高效液相色谱仪;pH计PHS-25数显(0.01级)(上海雷磁精密仪器厂);电子天平(BP190SMax200gd=0.1mg);台式离心机TDL80-2B(上海安亭科学仪器
2P为标样中多杀菌素的含量(mg/L)
4 结果与讨论4.1 色谱条件的确定
5,6〕
据文献报道〔和实验对比筛选,确定了检测波长、流
动相配比、
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μm,天津自动科学厂);超声波清洗器;微孔滤膜(F型0.45仪器公司)。
1.2 试剂
甲醇(色谱纯,上海化学试剂研究所);乙腈(色谱纯,中国医药集团上海化学试剂公司);超滤水(自制);多杀菌素标准品(含量≥99%)。
2 色谱工作条件
μm,250×色谱柱:Agilend0213Nucleosil100-5C185
4.0mm;检测器:紫外光度检测器,波长250nm;流动相:甲醇/乙腈/水=45/45/10(v/v),含有0.05%的乙酸钠;流速:1.
(
多杀菌素A的出峰时间为9.389min,
μ0ml/min;进样量:20l;柱温:室温。
3 实验方法3.1 标准溶液的配制
多杀菌素D的出峰时间为10.940min)图1 多杀菌素标样高效液相色谱图
准确称取多杀菌素标样0.025g,加入10ml甲醇,并反μm的滤纸过复振荡,使标样完全溶解,离心,上清液用0.45滤,即可用于HPLC测定。
3.2 试样溶液的配制
取10ml发酵液样离心,弃去上清液,向沉淀中添加
10ml甲醇,并反复振荡,使多杀菌素完全溶解。再次离心,
μm的滤纸过滤上清液,即可用于HPLC测定。用0.45
3.3 测定方法
在上述色谱工作条件下,待仪器基线稳定后,连续注入数针标准溶液,计算各针相对响应值的重复性,待相邻两针的响应值变化小于1.5%后,按照标准溶液、样品溶液、样品
(多杀菌素A的出峰时间为9.403min,
多杀菌素D的出峰时间为10.972min)图2 多杀菌素发酵液高效液相色谱图
28
4.2 分析方法的线性相关性测定
PESTICIDES Vol142 No110 (2003)
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多杀菌素标准品分别配制成50、125、250、500、1000、
1250mg/L六种不同浓度的标准溶液,在要求的色谱条件下
进行相同体积的进样,以浓度为横坐标,峰面积为纵坐标作图可得一直线(图3),考察峰面积Area(mAU3min)与浓度
Amt(mg/L)的关系。从图3得到多杀菌素HPLC分析法的
〔2〕 NakatsukasaWM,BoeckL,OccolowitzJL,etal.A83543A-D,uniquefermentation-derivedtetracyclicmacrolides.Tetrahed2tonLett.,1991,32:4839-4842
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4.4 分析方法的准确度测定
采用标准添加法,在已知含量的样品中添加一定量的已知标准品,在上述液相色谱条件下进行6次重复测定,测得平均回收率为96.94%。
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