中华病理学杂志1997年2月第26卷第1期
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共刺激分子
B7. 1在淋巴瘤组织中的表达
孙 毅 陈蕴颖 司履生
摘要 目的 研究免疫共刺激分子B7. 1在淋巴瘤组织中的表达及其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用。 方法 利用R T-P CR 及原位杂交技术对12例新鲜及23例石蜡包埋淋巴瘤组织中B7. 1的表达进行了检测。 结果 10/12例新鲜瘤组织及16/23例石蜡包埋瘤组织B 7. 1表达阳性, 同时还意外发现, 所有阳性标本中还强表达一种与正常B7. 1分子不同但与其相关的m RNA 转录子。 结论 该转录子与淋巴瘤的关系及在肿瘤免疫中的作用值得深入研究
关键词 淋巴瘤 淋巴细胞转化 肿瘤免疫 原位杂交 聚合酶链反应
The expr ession of cost imula ting molecule B7. 1in lymphoma tissues. Sun Y i , Chen Yunying , Si Lusheng. Immunopathology Depar tment, Xian Medical Univer sity, Xia n 710061
Abstr act Objective To study the expr ession of immuno -costimulating molecule B 7. 1in lym- Using the R T -P CR a nd in situ hy-phoma tissue and its par t in im muno escape mechanism . M ethods
bridization(ISH) tech niques, the expression of B7. 1molecule in 12fresh and 23pa raffin embedded tissues were studied. Results (1) B7. 1m RN A t ransc ription was detec ted in 10/12lymphoma tissues by RT-PCR ; (2) m RN A expression in 16/23lymphoma tissues was detected by IS H with D ig -la belling B 7. 1cDNA probe . Alternatively , a 450bp by tra nscript tha t was r eleva nt to the norma l B 7. 1molecule was cloned and studied by R T-PC R and IS H respec tively. Conclusion More in depth studies should be performed on the rela tion between the tr anscript molecule and lymphoma and its effect on tumor immunity .
Key wor ds Lymphoma Lymphocyte t ransfor ma tion In situ h bridization Polymer ase chain r eac tion
机体抗肿瘤免疫的发生依赖T 细胞介导的肿瘤特异性细胞免疫。已知T 细胞特异性活化除需T 细胞受体(TCR ) 与M HC 抗原肽复合物的结合外, 还需由抗原提呈细胞提供的共刺激信号的参与, 而只受到第一类信号刺激的T 细胞将发生克隆无能或凋亡现象[1]。
B 7. 1分子是目前研究最多也是最重要的共刺激分子, 其缺乏或封闭可抑制T 细胞增殖并诱导克隆无能。已积累的体外及动物实验资料似乎证明, 肿瘤细胞缺乏共刺激信号可能是其抗原提呈缺陷并最终导致免疫逃逸的原因之一。已有研究表明某些淋巴瘤细胞株在体外的
本课题受国家自然科学基金资助
作者单位:710061 西安医科大学免疫病理学研究室
培养中可表达B 7. 1分子, 但在体内瘤细胞是
否表达B7. 1分子和所表达的B7. 1分子在结构、功能上与正常B7. 1分子是否相同及其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用尚待深入研究。最近, 我们利RT -PCR 及原位杂交技术对一组淋巴瘤组织中B7. 1mRN A 的表达做了研究。
材料和方法
1. 标本:12例非何杰金淋巴瘤(NHL, 6例B 细胞性, 2例T 细胞性, 另4例未做免疫分型) , 组织新鲜取材, -70℃保存备用。用于原位杂交(IS H) 的23例淋巴瘤组织(17例B 细胞性, 3例T 细胞性, 另3例未做分型) , 为10%福马林固定, 石蜡包埋组织, 5μm 厚连续切片, 贴于涂有APE S 的载玻片上, 60℃烤6小时, 备用。
2. RN A 的提取:2～3mg 冰冻瘤组织, 仔细粉碎后按常规RN A 提取方法抽提总RN A 。
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3. m RN A 逆转录(R T):取RN A 模板约1μg, 加入B7. 1特异性上游引物(5′ATG GGC CAC ACA CGG ′) 25pmol , 再依次加入1×AMV 逆转AGG CAG GG 3
录酶Buffer , 四种dNT P 各1mmol /L , RNasin 20U , AMV 逆转录酶16U, 总反应体系20μl, 充分混匀, 42℃水浴1小时后95℃5min 中止反应。
4. 聚合酶链反应(PCR ):取RT 反应产物10μl , 依次加入B 7. 1下游引物(5′TAC AGG GCG TAC ACT TTC CCT TC3′) 25pmol, Taq 酶2U, 1×PCR Buffer, 总反应体系50μl, 预计扩增片段含盖B7. 1氨基酸编码Chin J Pathol , Februar y 1997, Vol 26, No . 1
与电泳结果符合, 提示该450bp DN A 与B7. 1
cDN A 有同源图(2)
。
区共864bp 。循环参数为94℃变性1分钟, 55℃退火1. 5分钟, 72℃延伸2分钟, 共循环30次。同时以B7. 1cDN A 质粒做阳性对照。看家基因β-actin 做内对照(上游引物5′CGC GAG AAG ATG ACC CAG ATC ATG 3′, 下游引物5′AGG ATC T TC ATG AGG TAG TCA GT 3′) 。取8μl PCR 产物在1. 2%琼脂糖凝胶中电泳, EB 染色, 紫外透射下观察。
5. 探针的标记:利用P CR Dig-11-dUT P 掺入法分别对上述的PCR 产物进行标记, 反应体系中1/2dT TP 由Dig -11-dU TP 取代, PCR 反应条件及循环参数同上。标记后的探针质量及特异性按B /M公司提供的方法进行检测, 均符合要求。
6. 原位杂交:石蜡切片脱蜡, 水化后行0. 2mol /L 盐酸处理, 4μg /ml 蛋白酶K 消化, 4%多聚甲醛后固定, 逐级酒精脱水, 进而每片组织加20～50μl 杂交混合液(4×SSC, 5×Denhardt ′s, 10%V RC, 500μg ssDNA, 100μg polg A , 10%Dextr an sulfate , 内含探针40ng ) 。42℃杂交过夜, 杂交后用2×SSC 彻底振洗2小时, 并以NBT /BCIP 显色。实验中同时设计了RNa se 消化对照, 空白杂交液对照, 以确保杂交结果的可靠。
结果
1. RT-PCR 检测:从淋巴瘤组织中提取的RN A 经用B 7. 1特异性引物RT -PCR 后, 1. 2%琼脂糖凝胶电泳, 12例淋巴瘤组织除2例阴性外(其中1例为B 细胞性, 另1例未做分型) , 其余10例在864bp 位置上均扩增出特异性条带, 仅2例带形清晰, 其余8例均可见一较弱的扩增产物带。此外, 该10例标本在450bp 位置上均有一强的DN A 条带, 与预计扩增片段(864bp ) 明显不同(图1) 。进一步将该电泳结果通过电转印装置转印后, 用地高辛探记的B 7. 1c D N A 探针行S outhern 杂交后, 所得结果
M :标准分子量参照物:1k b Ladder , 1, 2
:B 7. 1cDNA 质粒阳性对照, S1, S4, S6, S8:淋巴瘤标本, C :β-acti n 内对照
图1 R T-PCR
琼脂糖凝胶电泳结果
图2 S ou th ern 杂交结果(图示同图1)
2. 肿瘤组织的原位杂交:应用地高辛标记的探针对23例淋巴瘤组织进行原位杂交, 结果
显示, 用正常B 7. 1cDN A 探针检测, 16例显示阳性信号, 杂交产物呈蓝紫色(图3) , 位于瘤细胞胞浆, 其中部分瘤细胞呈阴性, 淋巴瘤组织中的浸润淋巴细胞及血管内皮细胞也呈阳性。而用450bp 的RT -PCR 产物做探针, 杂交结果显示, 23例呈强阳性, 阳性瘤细胞呈弥漫性分布, 间质细胞无杂交信号(图4) 。空白对照及RNase 消化后阴性对照结果示阴性, 证明杂交结果可靠。
讨
论
特异性肿瘤抗原的存在已是肯定的事实。但阐明肿瘤逃逸宿主免疫监视的机制仍是目前肿瘤免疫预防及治疗的核心问题。研究证实, 在
肿瘤免疫中占主导地位的T 细胞的活化、增殖、分化、产生细胞因子等反应需要双信号刺激, 只有在共刺激信号存在的情况下, T C R 的
中华病理学杂志1997年2月第26卷第1期
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被结合才可能引起T 细胞完全活化, 而有无共刺激信号的存在将决定接受抗原刺激的T 细胞的最终命运。对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL) 的研究发现, TIL 一般为不具有杀伤活性的静止T 细胞, 但在体外经白细胞介素-2(IL-2) 刺激后活化成为可杀伤肿瘤细胞的效应细胞, 其表现酷似反应无能的T 细胞, 恰与缺乏共刺激信号仅受抗原刺激的T 细胞表现一致。这提示肿瘤细胞做为一种抗原提呈细胞, 除可因完全或来对肿瘤抗原研究所取得的进展, 表明肿瘤的
确普遍存在有特异性抗原。因此, 可以认为,
+
M HCA g B 7. 1的肿瘤细胞具有完善的抗原提呈能力, 能够激发宿主的抗瘤免疫反应。这些肿
瘤的免疫逃逸机制也许与抗原提呈以后的效应机制有关。关于淋巴瘤细胞表达B7. 1抗原的机理, 我们认为可分为两种情况:一是某些淋巴细胞本来能有B7. 1抗原的表达, 这些细胞发生恶变后也有可能继续表达B7. 1抗原; 另一部分丢失MHC 抗原而无抗原提呈能力导致T 细胞不活化外, 目前认为, 多数肿瘤细胞缺乏共刺激分子似乎是导致T IL 不活化的主要原因。B 7. 1是目前研究最多也是最重要的共刺激信号分子, 转染B7. 1抗原基因的小鼠黑色素瘤细胞在体内可引起B7. 1相应受体CD28阳性的T 细胞对未转染B 7. 1基因的黑色素瘤的排斥。共转染人乳头瘤病毒E7基因及B7抗原基因的黑色素瘤细胞株在小鼠体内可诱发远隔部位E 7阳性B 7阴性肿瘤的消退[2]。体外实验中, 外周静止T 细胞在CD 3抗体的协同下, 可对强制性表达B7cDN A 的鼠Fc γRII 阳性
P 815肥大细胞瘤产生细胞毒效应[3]
。Azuma 等[4]发现缺乏B 7抗原表达的Burkitt 淋巴瘤细胞株不能刺激同种混合淋巴细胞反应(MLR ) , 但转染B7后成为MLR 的有力刺激原, 并且使用B7抗体可阻断其MLR 。在N K 细胞杀伤活化方面, B 7/CD 28共刺激信号, PMA , IL -2三者联合作用可产生最佳的N K 细胞增殖及TN F, IFN-γ分泌在肿瘤杀伤中起着重要的作用[5]
。但目前关于B7. 1的研究主要集中于动物及体外实验, 而人体肿瘤的资料甚少。
有报道在体外培养中, 某些淋巴瘤细胞株可表达B7. 1分子, 但其是否反映体内的真实状况值得进一步证实。在本实验中, 我们利用RT -PCR , 原位杂交技术对一组淋巴瘤组织中B7. 1mRN A 表达做了研究, 发现大部分瘤组织B7. 1表达阳性。仅有少部分瘤组织中的确不表达B 7. 1。以往许多报道都证实大多数肿瘤的瘤细胞不仅不丢失M HC I 类抗原, 而且约半数肿瘤还获得了M HC II 类抗原表达[6]
。加之, 近年
种情况是本来不表达B7. 1抗原的细胞, 在癌变过程中, 可以获得性表达B 7. 1抗原。D h ring 等人[7]的研究表明转染B7. 1基因的肿瘤细胞在无Th 细胞及其他辅助细胞参与的情况下, 可直接引起细胞毒效应。现认为在肿瘤发生的早期, 瘤细胞表达B 7. 1抗原与某些肿瘤的自发性消退有关[8]。而淋巴瘤时是否也是如此尚不明确。在对淋巴瘤组织RT-PCR 过程中, 我们利用B7. 1cDN A 特异性引物意外扩增到了一仅450bp 的cDN A 片段, 通过Southern 杂交也证实该片段与B7. 1cDN A 有同源性。进一步用地高辛将这一cDN A 片段进行标记并做为探针对淋巴瘤组织行原位杂交, 结果显示所有淋巴瘤组织中瘤细胞均强表达该450bp 的mRN A, 这一结果与Hersey 等人[9]的报道相近。他们在人黑色素瘤中也发现了一450bp mRN A 的转录, 并认为这是由于B7. 1基因的不同拼接形式所致[9]。最近Guo 等人[10]对小鼠淋巴瘤细胞株的研究结果证实, 瘤细胞株表达一种异常的B7转录子, 由于该转录子缺失了与B 7受体CD 28结合相关的一个外显子从而导致该异常B 7转录子功能上的失活。本实验所发现的这一450bp 的转录子是否与之有相似之处尚待进一步证实。
(本文图3, 4见插页第3页) 参
考
文
献
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duction o f CD cyt otoxic T lymphocyt es i n th e abs ence 28
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(收稿:1996-02-16 修回:1996-07-15)
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(本文编辑:霍临明)
乳房骨肉瘤一例
丛孟璇
患者女, 45岁。乳房无痛性包块10余年, 1995年10月26日入院。查体:右乳房包块为5cm ×5cm ×5cm 大小, 触之活动, 质硬, 无压痛, 于1995年10月30日行乳腺癌根治术切除。
病理检查:肉眼观察, 全切乳房及腋下组织, 乳头不下陷, 肿物局部表皮无桔皮样改变, 在乳房外上象限在一5cm ×5cm ×5cm 大小的包块, 切开有陈旧性血液流出, 肿物无明显包膜, 切面呈灰白色, 软硬不一, 似有骨组织, 刀切有阻挡感。腋下组织中未查到肿大的淋巴结。镜下观察:见不规则的出血坏死区, 坏死处尚可见骨小梁和间质组织的轮廓。在无坏死区可见明显的成骨和成软骨现象, 新生的骨小梁肥胖, 不规则(图1) 。在其周围可见间变的瘤细胞, 胞核大, 不规则, 核膜清楚, 颗粒较粗且分布不均。瘤细胞形态不一, 有多角形, 梭形及卵圆形等。细胞浆明显嗜酸性, 还可见大小不等形状不规则的软骨灶, 并伴有不均的钙化, 软骨陷窝大小不一, 细胞极不一致。在骨及软骨之间可见大片有明显异型性的纤维间质和增生的梭形细胞及多少不等的多核巨细胞(图1, 2) 。在间质中有多少不等, 大小各异的
(收稿:1995-12-08 修回:1996-10-24)
作者单位:271400 山东省宁阳县第一人民医院病理科
血管。所取的多块组织中均未见到肿瘤性腺体或上皮样组织分化。
病理诊断:乳房骨肉瘤。
讨论:(1) 骨肉瘤并不少见。发生于非骨组织的骨肉瘤称为骨外骨肉瘤则很少见, 可见于下肢软组织, 腹膜后、肾脏、肺、膀胱子宫等处, 而发生于乳房者更为少见。据统计约占乳腺肉瘤的0. 15%～0. 25%。发病平均年龄40岁～50岁, 本例45岁正值好发年龄。(2) 发生于骨组织的骨肉瘤诊断并不难, 但发生于软组织则易漏诊, 发生在乳房者多误诊。本例特点有明显的异型性骨母细胞, 并产生肿瘤性骨小梁。因本病可见成骨或成软骨现象, 故应与乳房其它肿瘤的骨或软骨化生鉴别, 在化生病变中, 骨和软骨成分皆为分化较好的成熟组织, 并无异型性, 而在乳房骨肉瘤中则为分化差的、具有明显异型性的幼稚骨母细胞, 有典型肿瘤性新生骨形成, 其骨小梁不规则, 钙化不均匀。此外, 在乳腺癌的病例中也可发生骨化生, 但其化生部分皆为成熟骨。
(本文图1, 2见插页第10页)
(本文编辑:蔡振国)
共刺激分子B7. 1在淋巴瘤组织中的表达
(正文见23页
)
图3 淋巴瘤细胞胞浆内蓝紫色杂交产物 ISH ×600 图4 淋巴瘤阳性细胞弥漫分布, 间质细胞无杂交信号 ISH ×400
EB 病毒潜在膜蛋白在食管癌和癌旁粘膜中的表达
(正文见49页
)
图1 食管低分化鳞癌, 癌细胞胞浆EBV LM P-1弥漫阳性 S-P 法, 苏木素复染×200图2 EB V 阳性癌组织, 癌细胞胞浆疏松及空泡变 HE ×200
胰腺乳头-实性上皮瘤一例
(正文见30页
)
图1 瘤细胞因粘液变性而似丛状排列, 胞浆较丰富, 嗜碱性, 核卵圆形 HE ×400图2 瘤细胞CgA 可疑阳性 S P 法×400
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中华病理学杂志1997年2月第26卷第1期
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共刺激分子
B7. 1在淋巴瘤组织中的表达
孙 毅 陈蕴颖 司履生
摘要 目的 研究免疫共刺激分子B7. 1在淋巴瘤组织中的表达及其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用。 方法 利用R T-P CR 及原位杂交技术对12例新鲜及23例石蜡包埋淋巴瘤组织中B7. 1的表达进行了检测。 结果 10/12例新鲜瘤组织及16/23例石蜡包埋瘤组织B 7. 1表达阳性, 同时还意外发现, 所有阳性标本中还强表达一种与正常B7. 1分子不同但与其相关的m RNA 转录子。 结论 该转录子与淋巴瘤的关系及在肿瘤免疫中的作用值得深入研究
关键词 淋巴瘤 淋巴细胞转化 肿瘤免疫 原位杂交 聚合酶链反应
The expr ession of cost imula ting molecule B7. 1in lymphoma tissues. Sun Y i , Chen Yunying , Si Lusheng. Immunopathology Depar tment, Xian Medical Univer sity, Xia n 710061
Abstr act Objective To study the expr ession of immuno -costimulating molecule B 7. 1in lym- Using the R T -P CR a nd in situ hy-phoma tissue and its par t in im muno escape mechanism . M ethods
bridization(ISH) tech niques, the expression of B7. 1molecule in 12fresh and 23pa raffin embedded tissues were studied. Results (1) B7. 1m RN A t ransc ription was detec ted in 10/12lymphoma tissues by RT-PCR ; (2) m RN A expression in 16/23lymphoma tissues was detected by IS H with D ig -la belling B 7. 1cDNA probe . Alternatively , a 450bp by tra nscript tha t was r eleva nt to the norma l B 7. 1molecule was cloned and studied by R T-PC R and IS H respec tively. Conclusion More in depth studies should be performed on the rela tion between the tr anscript molecule and lymphoma and its effect on tumor immunity .
Key wor ds Lymphoma Lymphocyte t ransfor ma tion In situ h bridization Polymer ase chain r eac tion
机体抗肿瘤免疫的发生依赖T 细胞介导的肿瘤特异性细胞免疫。已知T 细胞特异性活化除需T 细胞受体(TCR ) 与M HC 抗原肽复合物的结合外, 还需由抗原提呈细胞提供的共刺激信号的参与, 而只受到第一类信号刺激的T 细胞将发生克隆无能或凋亡现象[1]。
B 7. 1分子是目前研究最多也是最重要的共刺激分子, 其缺乏或封闭可抑制T 细胞增殖并诱导克隆无能。已积累的体外及动物实验资料似乎证明, 肿瘤细胞缺乏共刺激信号可能是其抗原提呈缺陷并最终导致免疫逃逸的原因之一。已有研究表明某些淋巴瘤细胞株在体外的
本课题受国家自然科学基金资助
作者单位:710061 西安医科大学免疫病理学研究室
培养中可表达B 7. 1分子, 但在体内瘤细胞是
否表达B7. 1分子和所表达的B7. 1分子在结构、功能上与正常B7. 1分子是否相同及其在肿瘤免疫逃逸机制中的作用尚待深入研究。最近, 我们利RT -PCR 及原位杂交技术对一组淋巴瘤组织中B7. 1mRN A 的表达做了研究。
材料和方法
1. 标本:12例非何杰金淋巴瘤(NHL, 6例B 细胞性, 2例T 细胞性, 另4例未做免疫分型) , 组织新鲜取材, -70℃保存备用。用于原位杂交(IS H) 的23例淋巴瘤组织(17例B 细胞性, 3例T 细胞性, 另3例未做分型) , 为10%福马林固定, 石蜡包埋组织, 5μm 厚连续切片, 贴于涂有APE S 的载玻片上, 60℃烤6小时, 备用。
2. RN A 的提取:2～3mg 冰冻瘤组织, 仔细粉碎后按常规RN A 提取方法抽提总RN A 。
24
3. m RN A 逆转录(R T):取RN A 模板约1μg, 加入B7. 1特异性上游引物(5′ATG GGC CAC ACA CGG ′) 25pmol , 再依次加入1×AMV 逆转AGG CAG GG 3
录酶Buffer , 四种dNT P 各1mmol /L , RNasin 20U , AMV 逆转录酶16U, 总反应体系20μl, 充分混匀, 42℃水浴1小时后95℃5min 中止反应。
4. 聚合酶链反应(PCR ):取RT 反应产物10μl , 依次加入B 7. 1下游引物(5′TAC AGG GCG TAC ACT TTC CCT TC3′) 25pmol, Taq 酶2U, 1×PCR Buffer, 总反应体系50μl, 预计扩增片段含盖B7. 1氨基酸编码Chin J Pathol , Februar y 1997, Vol 26, No . 1
与电泳结果符合, 提示该450bp DN A 与B7. 1
cDN A 有同源图(2)
。
区共864bp 。循环参数为94℃变性1分钟, 55℃退火1. 5分钟, 72℃延伸2分钟, 共循环30次。同时以B7. 1cDN A 质粒做阳性对照。看家基因β-actin 做内对照(上游引物5′CGC GAG AAG ATG ACC CAG ATC ATG 3′, 下游引物5′AGG ATC T TC ATG AGG TAG TCA GT 3′) 。取8μl PCR 产物在1. 2%琼脂糖凝胶中电泳, EB 染色, 紫外透射下观察。
5. 探针的标记:利用P CR Dig-11-dUT P 掺入法分别对上述的PCR 产物进行标记, 反应体系中1/2dT TP 由Dig -11-dU TP 取代, PCR 反应条件及循环参数同上。标记后的探针质量及特异性按B /M公司提供的方法进行检测, 均符合要求。
6. 原位杂交:石蜡切片脱蜡, 水化后行0. 2mol /L 盐酸处理, 4μg /ml 蛋白酶K 消化, 4%多聚甲醛后固定, 逐级酒精脱水, 进而每片组织加20～50μl 杂交混合液(4×SSC, 5×Denhardt ′s, 10%V RC, 500μg ssDNA, 100μg polg A , 10%Dextr an sulfate , 内含探针40ng ) 。42℃杂交过夜, 杂交后用2×SSC 彻底振洗2小时, 并以NBT /BCIP 显色。实验中同时设计了RNa se 消化对照, 空白杂交液对照, 以确保杂交结果的可靠。
结果
1. RT-PCR 检测:从淋巴瘤组织中提取的RN A 经用B 7. 1特异性引物RT -PCR 后, 1. 2%琼脂糖凝胶电泳, 12例淋巴瘤组织除2例阴性外(其中1例为B 细胞性, 另1例未做分型) , 其余10例在864bp 位置上均扩增出特异性条带, 仅2例带形清晰, 其余8例均可见一较弱的扩增产物带。此外, 该10例标本在450bp 位置上均有一强的DN A 条带, 与预计扩增片段(864bp ) 明显不同(图1) 。进一步将该电泳结果通过电转印装置转印后, 用地高辛探记的B 7. 1c D N A 探针行S outhern 杂交后, 所得结果
M :标准分子量参照物:1k b Ladder , 1, 2
:B 7. 1cDNA 质粒阳性对照, S1, S4, S6, S8:淋巴瘤标本, C :β-acti n 内对照
图1 R T-PCR
琼脂糖凝胶电泳结果
图2 S ou th ern 杂交结果(图示同图1)
2. 肿瘤组织的原位杂交:应用地高辛标记的探针对23例淋巴瘤组织进行原位杂交, 结果
显示, 用正常B 7. 1cDN A 探针检测, 16例显示阳性信号, 杂交产物呈蓝紫色(图3) , 位于瘤细胞胞浆, 其中部分瘤细胞呈阴性, 淋巴瘤组织中的浸润淋巴细胞及血管内皮细胞也呈阳性。而用450bp 的RT -PCR 产物做探针, 杂交结果显示, 23例呈强阳性, 阳性瘤细胞呈弥漫性分布, 间质细胞无杂交信号(图4) 。空白对照及RNase 消化后阴性对照结果示阴性, 证明杂交结果可靠。
讨
论
特异性肿瘤抗原的存在已是肯定的事实。但阐明肿瘤逃逸宿主免疫监视的机制仍是目前肿瘤免疫预防及治疗的核心问题。研究证实, 在
肿瘤免疫中占主导地位的T 细胞的活化、增殖、分化、产生细胞因子等反应需要双信号刺激, 只有在共刺激信号存在的情况下, T C R 的
中华病理学杂志1997年2月第26卷第1期
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被结合才可能引起T 细胞完全活化, 而有无共刺激信号的存在将决定接受抗原刺激的T 细胞的最终命运。对肿瘤浸润淋巴细胞(TIL) 的研究发现, TIL 一般为不具有杀伤活性的静止T 细胞, 但在体外经白细胞介素-2(IL-2) 刺激后活化成为可杀伤肿瘤细胞的效应细胞, 其表现酷似反应无能的T 细胞, 恰与缺乏共刺激信号仅受抗原刺激的T 细胞表现一致。这提示肿瘤细胞做为一种抗原提呈细胞, 除可因完全或来对肿瘤抗原研究所取得的进展, 表明肿瘤的
确普遍存在有特异性抗原。因此, 可以认为,
+
M HCA g B 7. 1的肿瘤细胞具有完善的抗原提呈能力, 能够激发宿主的抗瘤免疫反应。这些肿
瘤的免疫逃逸机制也许与抗原提呈以后的效应机制有关。关于淋巴瘤细胞表达B7. 1抗原的机理, 我们认为可分为两种情况:一是某些淋巴细胞本来能有B7. 1抗原的表达, 这些细胞发生恶变后也有可能继续表达B7. 1抗原; 另一部分丢失MHC 抗原而无抗原提呈能力导致T 细胞不活化外, 目前认为, 多数肿瘤细胞缺乏共刺激分子似乎是导致T IL 不活化的主要原因。B 7. 1是目前研究最多也是最重要的共刺激信号分子, 转染B7. 1抗原基因的小鼠黑色素瘤细胞在体内可引起B7. 1相应受体CD28阳性的T 细胞对未转染B 7. 1基因的黑色素瘤的排斥。共转染人乳头瘤病毒E7基因及B7抗原基因的黑色素瘤细胞株在小鼠体内可诱发远隔部位E 7阳性B 7阴性肿瘤的消退[2]。体外实验中, 外周静止T 细胞在CD 3抗体的协同下, 可对强制性表达B7cDN A 的鼠Fc γRII 阳性
P 815肥大细胞瘤产生细胞毒效应[3]
。Azuma 等[4]发现缺乏B 7抗原表达的Burkitt 淋巴瘤细胞株不能刺激同种混合淋巴细胞反应(MLR ) , 但转染B7后成为MLR 的有力刺激原, 并且使用B7抗体可阻断其MLR 。在N K 细胞杀伤活化方面, B 7/CD 28共刺激信号, PMA , IL -2三者联合作用可产生最佳的N K 细胞增殖及TN F, IFN-γ分泌在肿瘤杀伤中起着重要的作用[5]
。但目前关于B7. 1的研究主要集中于动物及体外实验, 而人体肿瘤的资料甚少。
有报道在体外培养中, 某些淋巴瘤细胞株可表达B7. 1分子, 但其是否反映体内的真实状况值得进一步证实。在本实验中, 我们利用RT -PCR , 原位杂交技术对一组淋巴瘤组织中B7. 1mRN A 表达做了研究, 发现大部分瘤组织B7. 1表达阳性。仅有少部分瘤组织中的确不表达B 7. 1。以往许多报道都证实大多数肿瘤的瘤细胞不仅不丢失M HC I 类抗原, 而且约半数肿瘤还获得了M HC II 类抗原表达[6]
。加之, 近年
种情况是本来不表达B7. 1抗原的细胞, 在癌变过程中, 可以获得性表达B 7. 1抗原。D h ring 等人[7]的研究表明转染B7. 1基因的肿瘤细胞在无Th 细胞及其他辅助细胞参与的情况下, 可直接引起细胞毒效应。现认为在肿瘤发生的早期, 瘤细胞表达B 7. 1抗原与某些肿瘤的自发性消退有关[8]。而淋巴瘤时是否也是如此尚不明确。在对淋巴瘤组织RT-PCR 过程中, 我们利用B7. 1cDN A 特异性引物意外扩增到了一仅450bp 的cDN A 片段, 通过Southern 杂交也证实该片段与B7. 1cDN A 有同源性。进一步用地高辛将这一cDN A 片段进行标记并做为探针对淋巴瘤组织行原位杂交, 结果显示所有淋巴瘤组织中瘤细胞均强表达该450bp 的mRN A, 这一结果与Hersey 等人[9]的报道相近。他们在人黑色素瘤中也发现了一450bp mRN A 的转录, 并认为这是由于B7. 1基因的不同拼接形式所致[9]。最近Guo 等人[10]对小鼠淋巴瘤细胞株的研究结果证实, 瘤细胞株表达一种异常的B7转录子, 由于该转录子缺失了与B 7受体CD 28结合相关的一个外显子从而导致该异常B 7转录子功能上的失活。本实验所发现的这一450bp 的转录子是否与之有相似之处尚待进一步证实。
(本文图3, 4见插页第3页) 参
考
文
献
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(收稿:1996-02-16 修回:1996-07-15)
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(本文编辑:霍临明)
乳房骨肉瘤一例
丛孟璇
患者女, 45岁。乳房无痛性包块10余年, 1995年10月26日入院。查体:右乳房包块为5cm ×5cm ×5cm 大小, 触之活动, 质硬, 无压痛, 于1995年10月30日行乳腺癌根治术切除。
病理检查:肉眼观察, 全切乳房及腋下组织, 乳头不下陷, 肿物局部表皮无桔皮样改变, 在乳房外上象限在一5cm ×5cm ×5cm 大小的包块, 切开有陈旧性血液流出, 肿物无明显包膜, 切面呈灰白色, 软硬不一, 似有骨组织, 刀切有阻挡感。腋下组织中未查到肿大的淋巴结。镜下观察:见不规则的出血坏死区, 坏死处尚可见骨小梁和间质组织的轮廓。在无坏死区可见明显的成骨和成软骨现象, 新生的骨小梁肥胖, 不规则(图1) 。在其周围可见间变的瘤细胞, 胞核大, 不规则, 核膜清楚, 颗粒较粗且分布不均。瘤细胞形态不一, 有多角形, 梭形及卵圆形等。细胞浆明显嗜酸性, 还可见大小不等形状不规则的软骨灶, 并伴有不均的钙化, 软骨陷窝大小不一, 细胞极不一致。在骨及软骨之间可见大片有明显异型性的纤维间质和增生的梭形细胞及多少不等的多核巨细胞(图1, 2) 。在间质中有多少不等, 大小各异的
(收稿:1995-12-08 修回:1996-10-24)
作者单位:271400 山东省宁阳县第一人民医院病理科
血管。所取的多块组织中均未见到肿瘤性腺体或上皮样组织分化。
病理诊断:乳房骨肉瘤。
讨论:(1) 骨肉瘤并不少见。发生于非骨组织的骨肉瘤称为骨外骨肉瘤则很少见, 可见于下肢软组织, 腹膜后、肾脏、肺、膀胱子宫等处, 而发生于乳房者更为少见。据统计约占乳腺肉瘤的0. 15%～0. 25%。发病平均年龄40岁～50岁, 本例45岁正值好发年龄。(2) 发生于骨组织的骨肉瘤诊断并不难, 但发生于软组织则易漏诊, 发生在乳房者多误诊。本例特点有明显的异型性骨母细胞, 并产生肿瘤性骨小梁。因本病可见成骨或成软骨现象, 故应与乳房其它肿瘤的骨或软骨化生鉴别, 在化生病变中, 骨和软骨成分皆为分化较好的成熟组织, 并无异型性, 而在乳房骨肉瘤中则为分化差的、具有明显异型性的幼稚骨母细胞, 有典型肿瘤性新生骨形成, 其骨小梁不规则, 钙化不均匀。此外, 在乳腺癌的病例中也可发生骨化生, 但其化生部分皆为成熟骨。
(本文图1, 2见插页第10页)
(本文编辑:蔡振国)
共刺激分子B7. 1在淋巴瘤组织中的表达
(正文见23页
)
图3 淋巴瘤细胞胞浆内蓝紫色杂交产物 ISH ×600 图4 淋巴瘤阳性细胞弥漫分布, 间质细胞无杂交信号 ISH ×400
EB 病毒潜在膜蛋白在食管癌和癌旁粘膜中的表达
(正文见49页
)
图1 食管低分化鳞癌, 癌细胞胞浆EBV LM P-1弥漫阳性 S-P 法, 苏木素复染×200图2 EB V 阳性癌组织, 癌细胞胞浆疏松及空泡变 HE ×200
胰腺乳头-实性上皮瘤一例
(正文见30页
)
图1 瘤细胞因粘液变性而似丛状排列, 胞浆较丰富, 嗜碱性, 核卵圆形 HE ×400图2 瘤细胞CgA 可疑阳性 S P 法×400
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