中国药事2007年第21卷第9期695
止血纤维素材料亚慢性毒性实验研究
王春仁, 王召旭, 宋谊萍, 彭新杰, 奚廷斐
(中国药品生物制品检定所, 北京 100050)
摘要: 按照GB/T16886111医疗器械生物学评价第11部分全身毒性试验的方法, 观察了止血纤维素材料对大鼠的全身亚慢性毒性反应, 其目的是找出止血纤维素材料毒副反应的靶器官, 确定是否有潜在的毒性反应, 研究发现止血纤维素材料试验液高、中、低三剂量组连续大鼠腹腔注射给样13周, 大鼠一般状况良好, 体重增加。给供试品后高、中、低剂量大鼠肝脏和脾脏系数与对照组比较有显著性差异。病理组织学检查各剂量组试验液对大鼠肝脏和脾脏均有不同的病理改变, 各试验动物脾脏被大量吞噬泡沫细胞充斥, 脾小结及红髓减少; 多数肝脏也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生。因此止血纤维素材料毒性可能的靶器官主要是肝脏和脾脏, 提示止血纤维素可能不完全降解而在体内蓄积所致。
关键词: 止血; 亚慢性毒性; 纤维素; 不良反应
中图分类号:R95 文献标识码:A 文章编号:1002-7777(2007) 09-0695-04The Subchronic Systemic Toxicity Investigation of Haemostatic Cellulose
Wang Chunren, W ang Zhao xu, So ng Yiping, Peng Xinjie and Xi Tingfei (National Institute for the Co ntro l of Phar maceutical and Bio logical Pr oducts, Beijing 100050)
ABSTRAC T The subchronic systemic toxicity of haemo static cellulose w as investigated based o n the method described in the GB/T16886111Biolog ical Evaluation of M edical Devices Part 11:Systemic Tox icity fo r finding possible target org an of the cellulose w hich po tentially cause to xic and side effect 1The determ ination o f tox icity w as based upo n clinical observatio n, animal/or gan w eights, haematolog ical parameter s and serum bio chemical analysis, necropsy observation and histopatholog ical assessment of selected tissues from animals ex posed to the test article extracts and co ntro l animals exposed to vehicle 1The results sho w ed the animals in test and contro l g roup did no t exhibit significant sig ns of clinical observatio n over the course of the study 1Necropsy fo und that the spleen enlarg em ent in the test g roups and spleen or gan index in the test g roups w as sig nificantly difference from the contro l g roups 1The histo patholog ical observation also fo und a lot of fo am y cells infiltr ated in the spleen and hepatic tissue 1The study co ncluded that the potential tox ic targ et o rgan of the haemostatic cellulose w as the spleen and liv er 1KEY WORDS H aemostatic; Subachronic Systemic T oxicity ; Cellulose; Side Effects 止血纤维素材料是采用脱脂纱布经羧基化化学变性制成的可以在水中溶解的止血产品, 在临床上广泛使用于创面渗血的局部止血, 具有比较良好的止血效果[1-3]。但是, 这类材料的主要成分是纤维素, 人体内没有纤维素酶将其降解, 也没有人体内的其他酶降解的报道, 因此溶解后的纤维素经吸收后小分子的纤维素有可能经尿排除体外, 大分子量的纤维素分子分布到身体的一些器官沉积。因此本产生的亚慢性毒性反应, 找出毒副反应的靶器官的情况, 确定是否有潜在的毒性反应。1 试验材料和方法111 试验材料11111 受试供试品物
止血纤维素为市场购买的止血纱布产品, 将样品按GB/T 16886112-2005医疗器械生物学评价第12部分样品制备和参照样品中规定的方法制备
696
11112 实验动物与饲养条件
Wistar 品系大鼠40只, 雌、雄各半, 体重120~160g, 由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供, 动物质量合格证号:SCXK11-00-0010号。购入的大鼠在中国药品生物制品检定所二级实验动物室饲养观察1周后用于试验。动物实验环境为清洁级, 人工光照时间12小时明, 12小时暗, 温度22e ~25e , 相对湿度40%~50%。笼具为无毒塑料盒, 不锈钢丝面罩, 体积545@395@200mm , 每笼5只大鼠。大鼠饮用水为净化水, 饲料为无菌块料。11113 实验仪器
日立7060全自动生化仪(日本制造) , MEK -6318K 全自动血球计数仪(日本制造) , 莱卡RM 2125石蜡切片机(德国) , FRISH ER-172自动染色机(美国) , SH AN DON-2000组织处理机(英国) , NIKON FX-35A 显微镜(日本制造) 。11114 试剂及溶剂
天门冬氨酸氨基转换酶(AST) , 丙氨酸氨基转换酶(ALT) , 碱性磷酸酶(ALP) , 尿素氮(BU N) , 总蛋白(TP) , 白蛋白(A LB) , 血糖(GLU ) , 胆红素(T -BIL) , 肌酐(CRE) , 总胆固醇(T-CH O) 试剂盒, 由北京中生生物高技术公司提供。112 试验方法
11211 给供试品途径
试验采用腹腔注射给供试品。11212 给供试品剂量
高剂量组:腹腔注射10m L #kg ; 中剂量组:腹腔注射5m L #kg -1; 低剂量组:腹腔注射215mL #kg -1; 对照组:腹腔注射等体积生理盐水(10m L #kg -1) 。11213 试验周期
周期13周。
11214 试验步骤及观察指标
大鼠在实验动物室饲养1周后, 按体重随机分为4组, 每组10只, 雌、雄各半, 分别腹腔注射止血纤维素试验液10m L #kg -1、5m L #kg -1和215m L #kg -1, 对照组给予生理盐水, 其体积均为10m L #kg 体重。
给供试品期间密切观察各组动物的外观体征、粪便性状, 每周称体重1次, 根据体重增长调整给供试品量。
隔日1次给供试品, 连续给13周。停供试品后, , 蛋-1
-1
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(H GB) 、红细胞数(RBC ) 、血小板数(PLT ) 、白细胞数(WBC) 、白细胞分类(DC) 和凝血时间(CT) 等血液学指标; 血液经离心分离血清, 测定天门冬氨酸氨基转换酶(AST ) 、丙氨酸氨基转换酶(ALT ) 、碱性磷酸酶(ALP) 、尿素氮(BUN) 、总蛋白(T P) 、白蛋白(ALB ) 、血糖(GLU) 、总胆红素(T -BIL) 、肌酐(CRE) 、总胆固醇(T-CH O) 等血清生化学指标。并于次日处死, 系统尸解, 称取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、子宫(卵巢) 、睾丸的重量并计算脏器系数, 另取部分组织, 肉眼观察后, 将上述组织全部放入中性10%甲醛溶液中固定, 石蜡切片、H E 染色、显微镜下观察各脏器的病理组织学变化。2 试验结果和讨论211 一般临床状况
给不同剂量的止血纤维素后, 大鼠的外观、行为正常, 活动自如, 毛色光泽, 眼、口、耳、鼻、生殖腺和肛门无异常分泌物。212 对体重的影响
大鼠体重增加, 与对照组(1~4周高剂量大鼠体重比对照组大鼠体重有所降低) 的增加相似, 无统计学差异。213 对摄食量的影响
大鼠的摄食情况, 给不同剂量的止血纤维素后摄食量的变化与对照组相似, 表明止血纤维素对动物的食欲无影响。214 对血液学指标的影响
给供试品13周后, 除中低剂量雄性大鼠WBC 、RBC 、H GB, 高剂量雄性大鼠RBC, 中低剂量雌雄性大鼠PLT 和高中低剂量雌雄性大鼠的H CT 、M CV 、M CH C 与对照组比较有显著性差异, 其它指标与对照组比较无显著性差异。215 对血清生化学指标的影响
给供试品13周后, 除低剂量雌性大鼠ALT 、CRE, 高剂量雌雄性大鼠和低剂量雌性大鼠TP, 高剂量雌性大鼠和中低剂量雄性大鼠ALB, 高剂量雄性大鼠BIL, 中剂量雄性大鼠ALP, 低剂量雌雄性大鼠CH O 及高低剂量雌性大鼠GLU 与对照组比较有显著性差异, 但均在正常值范围内。其它指标与对照组比较无显著性差异。对转氨酶和白蛋白的影响见表1和表2。216 对脏器系数的影响
给供试品13周后, 除肝脏系数及脾脏系数与对
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值范围内, 与对照组比较无明显差异。结果见表3。
表1 止血纤维素实验液对大鼠血清转氨酶的影响
组别对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
大鼠性别
雄雌雄雌雄雌雄雌
谷丙(u #L ) 4616? 7124512? 3183916? 15173118? 51
21)
20014? 2071035014? 4161038914? 3501265910? 54715
-1
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表2 止血纤维素浸提液对大鼠血清总蛋白和白蛋白的影响
组别对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
大鼠性别
雄雌雄雌雄雌雄雌
总蛋白(u #L -1) 7117? 2186914? 1176417? 31516717? 215
2)
谷草(u #L ) 13618? 181212918? 121512912? 201311518? 261033610? 2551265314? 7711745710? 3341466010? 42210
-1
白蛋白(u #L -1) 3516? 0163519? 0183318? 1141)
3611? 0123110? 2141) 3114? 4161) 2914? 0192) 3019? 2191)
5817? 6132)
5817? 9155711? 2182) 6016? 6141)
注:1) 与对照组比较, P
注:1) 与对照组比较, P
表3 止血纤维素试验液对大鼠脏器重量和脏器系数的影响
脏器脑
心
肝
脾
肺
肾
肾上腺
睾丸 前列腺 子宫和卵巢
性别雄雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄雄雌
对照组0144? 01020162? 01030132? 01040135? 01032159? 01062155? 01110121? 01020124? 01020136? 01020144? 01070162? 01030166? 01090101? 01000103? 01000167? 01020115? 01020128? 0106
低剂量组0143? 01040163? 01080130? 01020140? 01072191? 01393111? 01152) 0129? 01012) 0137? 01042)
0140? 01040149? 01030163? 01050167? 01030102? 01010103? 01000170? 01150115? 01030129? 0105
中剂量组0141? 01020167? 01040131? 01030136? 01022177? 01141) 3131? 01581) 0136? 01072) 0146? 01111)
0140? 01050149? 01020162? 01640173? 01080101? 01000103? 01010170? 01070113? 01010134? 0104
高剂量组0143? 01040169? 01070129? 01020135? 01032184? 01132) 3138? 01352) 0136? 01022) 0143? 01091)
0138? 01020153? 01080160? 01020172? 01070102? 01010103? 01000173? 01070116? 01040132? 0106
注:1) 与对照组比较, P
217 对病理组织学检查的影响
给供试品13周后, 肉眼观察, 各给供试品组个别动物有肠粘连, 大部分脾脏有肿大现象。病理组织学检查, 各剂量组的肝脏和脾脏有不同程度与受试物的毒性作用有关的病理组织学改变。
1) 对照组:共观察10只大鼠, 雌雄各半。各组织脏器未见异常。
2) 低剂量给药组:共观察10只大鼠, 雌雄各半。各动物脾脏(10/10) 被大量吞噬泡沫细胞充斥, 脾小结及红髓减少(见图1、图2) ; 多数肝脏(6/10) 也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生。各脏器被膜腹腔面有富含泡沫细胞的纤维素样粘连物外, 余各脏器未见明显异常。
3) 中剂量给药组:共观察10只大鼠, 雌雄各半。各动物脾脏(10/10)
被大量吞噬泡沫细胞充
图2 低剂量`组(图1放大照片, 脾白髓髓窦充满大量吞噬泡沫细胞。20X10, H 1E 1) 。
图1 低剂量`组(脾白髓髓窦充满大量吞噬泡沫细胞, 致使白髓淋巴细胞相对稀少, 脾小结数目亦减少, 脾脏变苍白, 肿大。10X10, H 1E 1)
。
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斥, 脾小结及红髓减少; 大多数肝脏(7/10) 也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生。各脏器被膜腹腔面有富含泡沫细胞的纤维素样粘连物外, 余各脏器未见明显异常。
4) 高剂量给药组:共观察10只大鼠, 雌雄各半。各动物脾脏(10/10) 被大量吞噬泡沫细胞充斥, 脾小结及红髓减少; 全部动物肝脏(10/10) 也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生(见图3、图4) 。各脏器被膜腹腔面有富含泡沫细胞的纤维素样粘连物外, 余各
脏器未见明显异常。
中国药事2007年第21卷第9期
分子的纤维素可以通过泌尿系统排除体外, 但是, 因为人体内没有降解纤维素的纤维素酶, 分子量大的纤维素有可能会在体内沉积, 因此对分子量的控制是非常必要的。研究发现, 在应用止血纤维素后所有的实验组均观察到肝脏和脾脏出现大量的泡沫细胞, 这是由于没有降解的纤维素颗粒被细胞吞噬后在细胞内蓄积形成的。泡沫细胞主要分布在肝脏的汇管区, 并且导致肝细胞的变性坏死, 实验发现高、中剂量的谷草、谷丙转氨酶指标大于正常值范围, 以及肝脏合成的白蛋白出现轻度降低, 提示泡沫细胞在肝脏的存在会损伤肝细胞的功能。在脾脏的泡沫细胞导致脾脏肿大, 脾小结及红髓减少, 损伤脾脏功能。
3 结论
本实验按照GB /T16886111(等同ISO10993111) 规定的方法[5], 对止血纤维素试验液高、中、低剂量连续大鼠腹腔注射进行了亚慢性毒性试验, 大鼠
图3 高剂量`组(可见小灶状泡沫细胞在汇管区及肝窦积聚, 该处肝细胞坏死变性, 可见小淋巴细胞浸润和窦内皮细胞增生。小胆管上皮亦见增生。10X10, H 1E 1)
。
腹腔注射止血纤维素试验液10mL #kg 、5m L #kg -1和215mL #kg -1连续13周。大鼠一般状况良好, 体重增加。血液学指标和生化学指标高、中剂量的谷草、谷丙转氨酶指标大于正常值范围, 其它指标基本在正常值范围内, 无明显临床意义。各脏器系数除肝、脾脏与对照组比较有显著性差异外, 其它指标均在正常值范围内。病理组织学检查主要发现肝脏和脾脏有不同程度病理学改变, 各脾脏被大量吞噬泡沫细胞充斥, 脾小结及红髓减少; 多数肝脏也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生。其余脏器未见与受试物毒性作用有关的病理组织学改变。止血纤维素可能的毒性靶器官主要是肝脏和脾脏。
参考文献:
[1][2][3]
崔国士, 马季玫1可溶性止血纱布的制备及其凝血作用研究[J]1河南科学, 2000, 18(2) :164
赵德民, 姜桂喜, 于沛林1消炎抗菌可溶止血纱布临床验证分析[J]1医药世界, 2006, No 11:57
Tomizaw a Y 1C linical benefits and ris k an alys is of topical hemostats:a review [J]1J Artif Organ s, 2005, 8(3) :137
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王春仁, 田文化, 雷学慧, 等1水溶性止血纺织材料止血机理研究[J], 生物医学工程通报, 1994, 6(1) :80ISO:ISO10993111-2005Biological evalu ation of medical devices , Part 11:
System ic toxicity [S ]1In ternational
Standard Organization, Gen eva, 2005
-1
图4 高剂量`组(可见小灶状泡沫细胞在汇管区及肝窦积聚, 该处肝细胞坏死变性, 可见小淋巴细胞浸润和窦内皮细胞增生。小胆管上皮亦见增生。10X10, H 1E 1) 。
218 讨论
从本试验结果可以看出, 止血纤维素主要对肝
脏和脾脏有明显的影响, 对其他脏器和系统没有表现出有意义的变化。目前还没有对止血纤维素亚急性和亚慢性全身毒性的报道。止血纤维素材料是采用脱脂纱布经羧基化化学变性制成的可以在水中溶解的止血产品, 其溶解性取决于羧基化的程度, 一般羧基化程度越高则溶解性越好, 但是溶解越好的同时其止血作用也会降低, 甚至出现抗凝血的作用, 但是溶解性差就会出现溶解不全的颗粒物质, 因此适当的羧基化程度对于保证有效的止血作用是很重要的
[4]
。
本试验还发现腹腔内有炎症和粘连反应, 主要可能是注射试验液刺激有关。纤维素在体内溶解后吸收可以通过血液循环分布到身体的其他部位, 小
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止血纤维素材料亚慢性毒性实验研究
王春仁, 王召旭, 宋谊萍, 彭新杰, 奚廷斐
(中国药品生物制品检定所, 北京 100050)
摘要: 按照GB/T16886111医疗器械生物学评价第11部分全身毒性试验的方法, 观察了止血纤维素材料对大鼠的全身亚慢性毒性反应, 其目的是找出止血纤维素材料毒副反应的靶器官, 确定是否有潜在的毒性反应, 研究发现止血纤维素材料试验液高、中、低三剂量组连续大鼠腹腔注射给样13周, 大鼠一般状况良好, 体重增加。给供试品后高、中、低剂量大鼠肝脏和脾脏系数与对照组比较有显著性差异。病理组织学检查各剂量组试验液对大鼠肝脏和脾脏均有不同的病理改变, 各试验动物脾脏被大量吞噬泡沫细胞充斥, 脾小结及红髓减少; 多数肝脏也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生。因此止血纤维素材料毒性可能的靶器官主要是肝脏和脾脏, 提示止血纤维素可能不完全降解而在体内蓄积所致。
关键词: 止血; 亚慢性毒性; 纤维素; 不良反应
中图分类号:R95 文献标识码:A 文章编号:1002-7777(2007) 09-0695-04The Subchronic Systemic Toxicity Investigation of Haemostatic Cellulose
Wang Chunren, W ang Zhao xu, So ng Yiping, Peng Xinjie and Xi Tingfei (National Institute for the Co ntro l of Phar maceutical and Bio logical Pr oducts, Beijing 100050)
ABSTRAC T The subchronic systemic toxicity of haemo static cellulose w as investigated based o n the method described in the GB/T16886111Biolog ical Evaluation of M edical Devices Part 11:Systemic Tox icity fo r finding possible target org an of the cellulose w hich po tentially cause to xic and side effect 1The determ ination o f tox icity w as based upo n clinical observatio n, animal/or gan w eights, haematolog ical parameter s and serum bio chemical analysis, necropsy observation and histopatholog ical assessment of selected tissues from animals ex posed to the test article extracts and co ntro l animals exposed to vehicle 1The results sho w ed the animals in test and contro l g roup did no t exhibit significant sig ns of clinical observatio n over the course of the study 1Necropsy fo und that the spleen enlarg em ent in the test g roups and spleen or gan index in the test g roups w as sig nificantly difference from the contro l g roups 1The histo patholog ical observation also fo und a lot of fo am y cells infiltr ated in the spleen and hepatic tissue 1The study co ncluded that the potential tox ic targ et o rgan of the haemostatic cellulose w as the spleen and liv er 1KEY WORDS H aemostatic; Subachronic Systemic T oxicity ; Cellulose; Side Effects 止血纤维素材料是采用脱脂纱布经羧基化化学变性制成的可以在水中溶解的止血产品, 在临床上广泛使用于创面渗血的局部止血, 具有比较良好的止血效果[1-3]。但是, 这类材料的主要成分是纤维素, 人体内没有纤维素酶将其降解, 也没有人体内的其他酶降解的报道, 因此溶解后的纤维素经吸收后小分子的纤维素有可能经尿排除体外, 大分子量的纤维素分子分布到身体的一些器官沉积。因此本产生的亚慢性毒性反应, 找出毒副反应的靶器官的情况, 确定是否有潜在的毒性反应。1 试验材料和方法111 试验材料11111 受试供试品物
止血纤维素为市场购买的止血纱布产品, 将样品按GB/T 16886112-2005医疗器械生物学评价第12部分样品制备和参照样品中规定的方法制备
696
11112 实验动物与饲养条件
Wistar 品系大鼠40只, 雌、雄各半, 体重120~160g, 由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供, 动物质量合格证号:SCXK11-00-0010号。购入的大鼠在中国药品生物制品检定所二级实验动物室饲养观察1周后用于试验。动物实验环境为清洁级, 人工光照时间12小时明, 12小时暗, 温度22e ~25e , 相对湿度40%~50%。笼具为无毒塑料盒, 不锈钢丝面罩, 体积545@395@200mm , 每笼5只大鼠。大鼠饮用水为净化水, 饲料为无菌块料。11113 实验仪器
日立7060全自动生化仪(日本制造) , MEK -6318K 全自动血球计数仪(日本制造) , 莱卡RM 2125石蜡切片机(德国) , FRISH ER-172自动染色机(美国) , SH AN DON-2000组织处理机(英国) , NIKON FX-35A 显微镜(日本制造) 。11114 试剂及溶剂
天门冬氨酸氨基转换酶(AST) , 丙氨酸氨基转换酶(ALT) , 碱性磷酸酶(ALP) , 尿素氮(BU N) , 总蛋白(TP) , 白蛋白(A LB) , 血糖(GLU ) , 胆红素(T -BIL) , 肌酐(CRE) , 总胆固醇(T-CH O) 试剂盒, 由北京中生生物高技术公司提供。112 试验方法
11211 给供试品途径
试验采用腹腔注射给供试品。11212 给供试品剂量
高剂量组:腹腔注射10m L #kg ; 中剂量组:腹腔注射5m L #kg -1; 低剂量组:腹腔注射215mL #kg -1; 对照组:腹腔注射等体积生理盐水(10m L #kg -1) 。11213 试验周期
周期13周。
11214 试验步骤及观察指标
大鼠在实验动物室饲养1周后, 按体重随机分为4组, 每组10只, 雌、雄各半, 分别腹腔注射止血纤维素试验液10m L #kg -1、5m L #kg -1和215m L #kg -1, 对照组给予生理盐水, 其体积均为10m L #kg 体重。
给供试品期间密切观察各组动物的外观体征、粪便性状, 每周称体重1次, 根据体重增长调整给供试品量。
隔日1次给供试品, 连续给13周。停供试品后, , 蛋-1
-1
中国药事2007年第21卷第9期
(H GB) 、红细胞数(RBC ) 、血小板数(PLT ) 、白细胞数(WBC) 、白细胞分类(DC) 和凝血时间(CT) 等血液学指标; 血液经离心分离血清, 测定天门冬氨酸氨基转换酶(AST ) 、丙氨酸氨基转换酶(ALT ) 、碱性磷酸酶(ALP) 、尿素氮(BUN) 、总蛋白(T P) 、白蛋白(ALB ) 、血糖(GLU) 、总胆红素(T -BIL) 、肌酐(CRE) 、总胆固醇(T-CH O) 等血清生化学指标。并于次日处死, 系统尸解, 称取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、子宫(卵巢) 、睾丸的重量并计算脏器系数, 另取部分组织, 肉眼观察后, 将上述组织全部放入中性10%甲醛溶液中固定, 石蜡切片、H E 染色、显微镜下观察各脏器的病理组织学变化。2 试验结果和讨论211 一般临床状况
给不同剂量的止血纤维素后, 大鼠的外观、行为正常, 活动自如, 毛色光泽, 眼、口、耳、鼻、生殖腺和肛门无异常分泌物。212 对体重的影响
大鼠体重增加, 与对照组(1~4周高剂量大鼠体重比对照组大鼠体重有所降低) 的增加相似, 无统计学差异。213 对摄食量的影响
大鼠的摄食情况, 给不同剂量的止血纤维素后摄食量的变化与对照组相似, 表明止血纤维素对动物的食欲无影响。214 对血液学指标的影响
给供试品13周后, 除中低剂量雄性大鼠WBC 、RBC 、H GB, 高剂量雄性大鼠RBC, 中低剂量雌雄性大鼠PLT 和高中低剂量雌雄性大鼠的H CT 、M CV 、M CH C 与对照组比较有显著性差异, 其它指标与对照组比较无显著性差异。215 对血清生化学指标的影响
给供试品13周后, 除低剂量雌性大鼠ALT 、CRE, 高剂量雌雄性大鼠和低剂量雌性大鼠TP, 高剂量雌性大鼠和中低剂量雄性大鼠ALB, 高剂量雄性大鼠BIL, 中剂量雄性大鼠ALP, 低剂量雌雄性大鼠CH O 及高低剂量雌性大鼠GLU 与对照组比较有显著性差异, 但均在正常值范围内。其它指标与对照组比较无显著性差异。对转氨酶和白蛋白的影响见表1和表2。216 对脏器系数的影响
给供试品13周后, 除肝脏系数及脾脏系数与对
中国药事2007年第21卷第9期
值范围内, 与对照组比较无明显差异。结果见表3。
表1 止血纤维素实验液对大鼠血清转氨酶的影响
组别对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
大鼠性别
雄雌雄雌雄雌雄雌
谷丙(u #L ) 4616? 7124512? 3183916? 15173118? 51
21)
20014? 2071035014? 4161038914? 3501265910? 54715
-1
697
表2 止血纤维素浸提液对大鼠血清总蛋白和白蛋白的影响
组别对照组
低剂量组
中剂量组
高剂量组
大鼠性别
雄雌雄雌雄雌雄雌
总蛋白(u #L -1) 7117? 2186914? 1176417? 31516717? 215
2)
谷草(u #L ) 13618? 181212918? 121512912? 201311518? 261033610? 2551265314? 7711745710? 3341466010? 42210
-1
白蛋白(u #L -1) 3516? 0163519? 0183318? 1141)
3611? 0123110? 2141) 3114? 4161) 2914? 0192) 3019? 2191)
5817? 6132)
5817? 9155711? 2182) 6016? 6141)
注:1) 与对照组比较, P
注:1) 与对照组比较, P
表3 止血纤维素试验液对大鼠脏器重量和脏器系数的影响
脏器脑
心
肝
脾
肺
肾
肾上腺
睾丸 前列腺 子宫和卵巢
性别雄雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄雌雄雄雌
对照组0144? 01020162? 01030132? 01040135? 01032159? 01062155? 01110121? 01020124? 01020136? 01020144? 01070162? 01030166? 01090101? 01000103? 01000167? 01020115? 01020128? 0106
低剂量组0143? 01040163? 01080130? 01020140? 01072191? 01393111? 01152) 0129? 01012) 0137? 01042)
0140? 01040149? 01030163? 01050167? 01030102? 01010103? 01000170? 01150115? 01030129? 0105
中剂量组0141? 01020167? 01040131? 01030136? 01022177? 01141) 3131? 01581) 0136? 01072) 0146? 01111)
0140? 01050149? 01020162? 01640173? 01080101? 01000103? 01010170? 01070113? 01010134? 0104
高剂量组0143? 01040169? 01070129? 01020135? 01032184? 01132) 3138? 01352) 0136? 01022) 0143? 01091)
0138? 01020153? 01080160? 01020172? 01070102? 01010103? 01000173? 01070116? 01040132? 0106
注:1) 与对照组比较, P
217 对病理组织学检查的影响
给供试品13周后, 肉眼观察, 各给供试品组个别动物有肠粘连, 大部分脾脏有肿大现象。病理组织学检查, 各剂量组的肝脏和脾脏有不同程度与受试物的毒性作用有关的病理组织学改变。
1) 对照组:共观察10只大鼠, 雌雄各半。各组织脏器未见异常。
2) 低剂量给药组:共观察10只大鼠, 雌雄各半。各动物脾脏(10/10) 被大量吞噬泡沫细胞充斥, 脾小结及红髓减少(见图1、图2) ; 多数肝脏(6/10) 也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生。各脏器被膜腹腔面有富含泡沫细胞的纤维素样粘连物外, 余各脏器未见明显异常。
3) 中剂量给药组:共观察10只大鼠, 雌雄各半。各动物脾脏(10/10)
被大量吞噬泡沫细胞充
图2 低剂量`组(图1放大照片, 脾白髓髓窦充满大量吞噬泡沫细胞。20X10, H 1E 1) 。
图1 低剂量`组(脾白髓髓窦充满大量吞噬泡沫细胞, 致使白髓淋巴细胞相对稀少, 脾小结数目亦减少, 脾脏变苍白, 肿大。10X10, H 1E 1)
。
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斥, 脾小结及红髓减少; 大多数肝脏(7/10) 也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生。各脏器被膜腹腔面有富含泡沫细胞的纤维素样粘连物外, 余各脏器未见明显异常。
4) 高剂量给药组:共观察10只大鼠, 雌雄各半。各动物脾脏(10/10) 被大量吞噬泡沫细胞充斥, 脾小结及红髓减少; 全部动物肝脏(10/10) 也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生(见图3、图4) 。各脏器被膜腹腔面有富含泡沫细胞的纤维素样粘连物外, 余各
脏器未见明显异常。
中国药事2007年第21卷第9期
分子的纤维素可以通过泌尿系统排除体外, 但是, 因为人体内没有降解纤维素的纤维素酶, 分子量大的纤维素有可能会在体内沉积, 因此对分子量的控制是非常必要的。研究发现, 在应用止血纤维素后所有的实验组均观察到肝脏和脾脏出现大量的泡沫细胞, 这是由于没有降解的纤维素颗粒被细胞吞噬后在细胞内蓄积形成的。泡沫细胞主要分布在肝脏的汇管区, 并且导致肝细胞的变性坏死, 实验发现高、中剂量的谷草、谷丙转氨酶指标大于正常值范围, 以及肝脏合成的白蛋白出现轻度降低, 提示泡沫细胞在肝脏的存在会损伤肝细胞的功能。在脾脏的泡沫细胞导致脾脏肿大, 脾小结及红髓减少, 损伤脾脏功能。
3 结论
本实验按照GB /T16886111(等同ISO10993111) 规定的方法[5], 对止血纤维素试验液高、中、低剂量连续大鼠腹腔注射进行了亚慢性毒性试验, 大鼠
图3 高剂量`组(可见小灶状泡沫细胞在汇管区及肝窦积聚, 该处肝细胞坏死变性, 可见小淋巴细胞浸润和窦内皮细胞增生。小胆管上皮亦见增生。10X10, H 1E 1)
。
腹腔注射止血纤维素试验液10mL #kg 、5m L #kg -1和215mL #kg -1连续13周。大鼠一般状况良好, 体重增加。血液学指标和生化学指标高、中剂量的谷草、谷丙转氨酶指标大于正常值范围, 其它指标基本在正常值范围内, 无明显临床意义。各脏器系数除肝、脾脏与对照组比较有显著性差异外, 其它指标均在正常值范围内。病理组织学检查主要发现肝脏和脾脏有不同程度病理学改变, 各脾脏被大量吞噬泡沫细胞充斥, 脾小结及红髓减少; 多数肝脏也见灶状泡沫细胞浸润, 汇管区尤甚, 伴淋巴细胞、窦内皮细胞增生。其余脏器未见与受试物毒性作用有关的病理组织学改变。止血纤维素可能的毒性靶器官主要是肝脏和脾脏。
参考文献:
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System ic toxicity [S ]1In ternational
Standard Organization, Gen eva, 2005
-1
图4 高剂量`组(可见小灶状泡沫细胞在汇管区及肝窦积聚, 该处肝细胞坏死变性, 可见小淋巴细胞浸润和窦内皮细胞增生。小胆管上皮亦见增生。10X10, H 1E 1) 。
218 讨论
从本试验结果可以看出, 止血纤维素主要对肝
脏和脾脏有明显的影响, 对其他脏器和系统没有表现出有意义的变化。目前还没有对止血纤维素亚急性和亚慢性全身毒性的报道。止血纤维素材料是采用脱脂纱布经羧基化化学变性制成的可以在水中溶解的止血产品, 其溶解性取决于羧基化的程度, 一般羧基化程度越高则溶解性越好, 但是溶解越好的同时其止血作用也会降低, 甚至出现抗凝血的作用, 但是溶解性差就会出现溶解不全的颗粒物质, 因此适当的羧基化程度对于保证有效的止血作用是很重要的
[4]
。
本试验还发现腹腔内有炎症和粘连反应, 主要可能是注射试验液刺激有关。纤维素在体内溶解后吸收可以通过血液循环分布到身体的其他部位, 小