浅析微生物计数方法的回收率
柴海毅
（上海诺狄生物科技有限公司，上海 201612）
摘要
回收率是衡量微生物方法验证中微生物恢复试验成功与否的关键指标，回收率限度标准设置是否合理，直接决定了微生物恢复试验是否可以被接受，也决定了微生物方法验证的成败。
关键词
恢复试验，回收率；生长曲线
文献标识码： A
文章编号： 1008-455X(2013) 01-0001-03
中图分类号： TQ460.38
Discussion of Recovery Rate Used in Microbial Count Method
Chai Haiyi
(Shanghai NOD Biotech Co., Ltd, Shanghai, 201612)
Abstract: Recovery rate is an important indicator of successful microbial recovery test in microbial method validation. Whether the limit of recovery rate is appropriate determines directly the acceptance of microbial recovery test and also the success of microbial method validation.
Keywords: recovery test; recovery rate; growth curve
微生物的限度检验，定量微生物检验方法，待检的微生物在固体表面上生长，繁殖形成肉眼可见的菌落后，才能够得到定量的数值。这也就是在目前各个国家的药典和官方的指导原则中，微生物的限度检测的两种经典的检验方法：平皿法（Plate-Count Methods）和薄膜过滤法（Mem b rane Filtration ）。凡是涉及微生物方法验证的各种验证试验，都是以恢复试验为基础的，微生物方法验证的实质就是评价和考察微生物恢复试验的可信度。恢复试验就是确认某一检验方法，它可以使加入其中的各种微生物都能够恢复生长。恢复生长是否被接受则是由恢复试验中各种测试菌的回收率来判定的。
微生物方法验证中回收率官方规定，中国药典2010年版 107页 附录Ⅺ J 微生物限度检查法中规定微生物计数方法验证中回收率的测试方法是加入50~100 CFU试验菌，回收率应不低于70%[1]。美国药典USP34-61中是这样规定微生物方法验证中回收
收稿日期：2012-07-12
作者简介：柴海毅（1963－），男，工程师，主要从事药品微生物检验，洁净室环境监测等工作。
Tel ：021-67871089 E-mail ：[email protected]
率的：For solid media, growth ob tained must not differ b y a factor greater than 2 from the calculated value for a standardized inoculum[2]。
对于固体培养基，获得的生长结果不得超过由标准接种而来的计算值的两倍范围。
可见，中国药典对于回收率规定，不但规定了试验菌悬液的浓度，而且设定了一个极为严格的合格限度是不低于70%。微生物测试方法有别于化学检验的一个重要区别是，对照溶液（菌悬液）不是固定不变的，而是一直在动态变化的。原因就在于验证测试的微生物是一个有生命活动的个体，微生物时刻都处于自己的生长状态中，每种微生物又都有着各自的生长曲线，微生物计数的数值实际上是测试菌悬液的微生物生长曲线中处于各阶段即延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期微生物生长的平均值。美国药典对微生物方法验证判定标准的回收率并没有规定一个具体的数值，而是依据标准样品测试的计数值，为回收率设置了一个基于标准样品上下一定范围的回收率合格区间。测试样品中微生物数量是否正确？验证回收率是否可以被接受？回
收率的判定是随着标准对照样品中微生物的数量不
物数量与标准对照样品计数的微生物数量的比值决定了这次回收率的合格的上下限，并没有设定一个单一的，固定不变的合格线。这样一个动态的回收率判定的规定，更加符合微生物的生长特性，在实际的检测和验证活动中更有实际意义。
那么，怎么来理解美国药典中关于回收率的2倍范围呢？
如果：
测试组计数
≤ 2，也就是：
对照组计数
测试组计数 ≤ 2 × 对照组计数
如果对照组计数值是80CFU ，那么测试组计数只要小于160CFU 即认为是可以接受的；这实际规定了测试组的上限。
如果：
对照组计数
≤ 2，也就是：
测试组计数
对照组计数
测试组计数 ≥ 2
综上：
对照组计数
≤ 测试组计数 ≤ 2 × 对照组计数
2
如果对照组计数值是80CFU ，那么测试组计数只要大于40CFU 即认为是可以接受的；这实际规定了测试组的下限。
次测试计数回收率的合格区间就是40~160CFU，换言之，测试组的计数如果在40~160CFU之间，验证测试结果是可以被接受的。
从上面简单的数学公式推导，我们不难看出，美国药典回收率的合格区间就是对照菌落数的上下两倍，即50%~200%之间都是符合要求的。
目前，国内制药企业在微生物方法验证中存在的最大困惑有二：一是验证试验前测试菌悬液和标准菌悬液的浓度很难把握，不容易制成单位浓度为50~100CFU的验证菌悬液；二是回收率70%的标准难以达标。归结原因，就在于中国药典为回收率设置了两个必须同时达到的指标：50~100CFU菌悬液下，回收率要大于或等于70%。
假如参照美国药典的回收率标准，实施微生物方法验证的操作难度将大为改观。
中国药典也在与时俱进，相信不远的将来，中国药典收载回收率的判定标准也会更加如实反映微生物的生长特性，接近或达到国际通用的微生物回收率标准。参考文献：
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2010年版二部[S].北京：
中国医药科技出版社，2010:附录:XIJ:109.
[2] USP34版2010 . MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF
NONSTERILE PRODUCTS MICROBIAL EUMERATION TESTS.
消息
艾默生数字控制阀帮助SECCO 公司年节约$40,000阀门维护费
器，转而使用Fisher FIELDVUE 6200f数字阀门定位器。
DVC6200f 具有无连杆、非接触式位置反馈功能，可以降低振动所引发的问题；此外，其还具备诊断和Foundation 现场总线通信功能，可在发生阀门问题时及时向操作人员发出相关警报。此仪器可轻松安装在任何阀门上，这一特点对于SECCO 工厂的情况来说尤为重要。此外，凭借DVC6200f 可预测潜在问题的内置诊断能力，操作人员可迅速采取必要措施，使过程变化降至最低或避免工厂停运，从而能够实现过程可靠性和性能。
安装艾默生的产品后，SECCO 工厂设施的稳定性和控制力得以明显提升，进而改善了运营状况。在提高生产效率的同时，还减少了废弃物排放和返工。由于阀门故障和定期维护的频率降低，因而使阀门性能变得更加可靠，运行时间也随之增加。通过消除频繁更换定位器的需求以及降低维护、人力和潜在生产损失，SECCO 预计每年可节省40,000美元。
Fisher FIELDVUE DVC6200f具有无连杆、非接触式位置反馈和FOUNDATION 现场总线通信功能，可提供有关潜在阀门问题的提示警报。
上海赛科石油化工有限责任公司(SECCO)阀门定位器更换为艾默生过程管理有限公司Fisher FIELDVUE DVC6200f 数字式阀门控制器后，SECCO 工厂在控制功能、生产效率和运行时间方面均获显著提升，节省了多达40,000美元的年度维护费用。
SECCO 是中国最大的综合化学存储设施供应商，其综合业务产品包括注入石油的乙烯裂解装置和使用上千种控制阀门（各种品牌、类型和尺寸）的十个下游衍生物工厂。由于过程中的温度波动会导致最终产物具有较高变异性，加上管道的振动，因此需要经常维护和更换相关阀门上的定位器。在SECCO 工程师和来自艾默生的Fisher 阀门专家讨论了解决此问题的各种方法之后，SECCO 决定更换厂内的现有设施定位
浅析微生物计数方法的回收率
柴海毅
（上海诺狄生物科技有限公司，上海 201612）
摘要
回收率是衡量微生物方法验证中微生物恢复试验成功与否的关键指标，回收率限度标准设置是否合理，直接决定了微生物恢复试验是否可以被接受，也决定了微生物方法验证的成败。
关键词
恢复试验，回收率；生长曲线
文献标识码： A
文章编号： 1008-455X(2013) 01-0001-03
中图分类号： TQ460.38
Discussion of Recovery Rate Used in Microbial Count Method
Chai Haiyi
(Shanghai NOD Biotech Co., Ltd, Shanghai, 201612)
Abstract: Recovery rate is an important indicator of successful microbial recovery test in microbial method validation. Whether the limit of recovery rate is appropriate determines directly the acceptance of microbial recovery test and also the success of microbial method validation.
Keywords: recovery test; recovery rate; growth curve
微生物的限度检验，定量微生物检验方法，待检的微生物在固体表面上生长，繁殖形成肉眼可见的菌落后，才能够得到定量的数值。这也就是在目前各个国家的药典和官方的指导原则中，微生物的限度检测的两种经典的检验方法：平皿法（Plate-Count Methods）和薄膜过滤法（Mem b rane Filtration ）。凡是涉及微生物方法验证的各种验证试验，都是以恢复试验为基础的，微生物方法验证的实质就是评价和考察微生物恢复试验的可信度。恢复试验就是确认某一检验方法，它可以使加入其中的各种微生物都能够恢复生长。恢复生长是否被接受则是由恢复试验中各种测试菌的回收率来判定的。
微生物方法验证中回收率官方规定，中国药典2010年版 107页 附录Ⅺ J 微生物限度检查法中规定微生物计数方法验证中回收率的测试方法是加入50~100 CFU试验菌，回收率应不低于70%[1]。美国药典USP34-61中是这样规定微生物方法验证中回收
收稿日期：2012-07-12
作者简介：柴海毅（1963－），男，工程师，主要从事药品微生物检验，洁净室环境监测等工作。
Tel ：021-67871089 E-mail ：[email protected]
率的：For solid media, growth ob tained must not differ b y a factor greater than 2 from the calculated value for a standardized inoculum[2]。
对于固体培养基，获得的生长结果不得超过由标准接种而来的计算值的两倍范围。
可见，中国药典对于回收率规定，不但规定了试验菌悬液的浓度，而且设定了一个极为严格的合格限度是不低于70%。微生物测试方法有别于化学检验的一个重要区别是，对照溶液（菌悬液）不是固定不变的，而是一直在动态变化的。原因就在于验证测试的微生物是一个有生命活动的个体，微生物时刻都处于自己的生长状态中，每种微生物又都有着各自的生长曲线，微生物计数的数值实际上是测试菌悬液的微生物生长曲线中处于各阶段即延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期微生物生长的平均值。美国药典对微生物方法验证判定标准的回收率并没有规定一个具体的数值，而是依据标准样品测试的计数值，为回收率设置了一个基于标准样品上下一定范围的回收率合格区间。测试样品中微生物数量是否正确？验证回收率是否可以被接受？回
收率的判定是随着标准对照样品中微生物的数量不
物数量与标准对照样品计数的微生物数量的比值决定了这次回收率的合格的上下限，并没有设定一个单一的，固定不变的合格线。这样一个动态的回收率判定的规定，更加符合微生物的生长特性，在实际的检测和验证活动中更有实际意义。
那么，怎么来理解美国药典中关于回收率的2倍范围呢？
如果：
测试组计数
≤ 2，也就是：
对照组计数
测试组计数 ≤ 2 × 对照组计数
如果对照组计数值是80CFU ，那么测试组计数只要小于160CFU 即认为是可以接受的；这实际规定了测试组的上限。
如果：
对照组计数
≤ 2，也就是：
测试组计数
对照组计数
测试组计数 ≥ 2
综上：
对照组计数
≤ 测试组计数 ≤ 2 × 对照组计数
2
如果对照组计数值是80CFU ，那么测试组计数只要大于40CFU 即认为是可以接受的；这实际规定了测试组的下限。
次测试计数回收率的合格区间就是40~160CFU，换言之，测试组的计数如果在40~160CFU之间，验证测试结果是可以被接受的。
从上面简单的数学公式推导，我们不难看出，美国药典回收率的合格区间就是对照菌落数的上下两倍，即50%~200%之间都是符合要求的。
目前，国内制药企业在微生物方法验证中存在的最大困惑有二：一是验证试验前测试菌悬液和标准菌悬液的浓度很难把握，不容易制成单位浓度为50~100CFU的验证菌悬液；二是回收率70%的标准难以达标。归结原因，就在于中国药典为回收率设置了两个必须同时达到的指标：50~100CFU菌悬液下，回收率要大于或等于70%。
假如参照美国药典的回收率标准，实施微生物方法验证的操作难度将大为改观。
中国药典也在与时俱进，相信不远的将来，中国药典收载回收率的判定标准也会更加如实反映微生物的生长特性，接近或达到国际通用的微生物回收率标准。参考文献：
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典：2010年版二部[S].北京：
中国医药科技出版社，2010:附录:XIJ:109.
[2] USP34版2010 . MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF
NONSTERILE PRODUCTS MICROBIAL EUMERATION TESTS.
消息
艾默生数字控制阀帮助SECCO 公司年节约$40,000阀门维护费
器，转而使用Fisher FIELDVUE 6200f数字阀门定位器。
DVC6200f 具有无连杆、非接触式位置反馈功能，可以降低振动所引发的问题；此外，其还具备诊断和Foundation 现场总线通信功能，可在发生阀门问题时及时向操作人员发出相关警报。此仪器可轻松安装在任何阀门上，这一特点对于SECCO 工厂的情况来说尤为重要。此外，凭借DVC6200f 可预测潜在问题的内置诊断能力，操作人员可迅速采取必要措施，使过程变化降至最低或避免工厂停运，从而能够实现过程可靠性和性能。
安装艾默生的产品后，SECCO 工厂设施的稳定性和控制力得以明显提升，进而改善了运营状况。在提高生产效率的同时，还减少了废弃物排放和返工。由于阀门故障和定期维护的频率降低，因而使阀门性能变得更加可靠，运行时间也随之增加。通过消除频繁更换定位器的需求以及降低维护、人力和潜在生产损失，SECCO 预计每年可节省40,000美元。
Fisher FIELDVUE DVC6200f具有无连杆、非接触式位置反馈和FOUNDATION 现场总线通信功能，可提供有关潜在阀门问题的提示警报。
上海赛科石油化工有限责任公司(SECCO)阀门定位器更换为艾默生过程管理有限公司Fisher FIELDVUE DVC6200f 数字式阀门控制器后，SECCO 工厂在控制功能、生产效率和运行时间方面均获显著提升，节省了多达40,000美元的年度维护费用。
SECCO 是中国最大的综合化学存储设施供应商，其综合业务产品包括注入石油的乙烯裂解装置和使用上千种控制阀门（各种品牌、类型和尺寸）的十个下游衍生物工厂。由于过程中的温度波动会导致最终产物具有较高变异性，加上管道的振动，因此需要经常维护和更换相关阀门上的定位器。在SECCO 工程师和来自艾默生的Fisher 阀门专家讨论了解决此问题的各种方法之后，SECCO 决定更换厂内的现有设施定位