中国知网查重多少钱
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小鼠腭裂相关基因的克隆、筛选及功能的研究--《中国人民解放军第四军医大学》2003年博士论文
腭裂是口腔也是全身较常见的先天性发育畸形，在亚洲、尤其是中国更是高发区。1996～2000年全国出生先天性畸形缺陷检测结果显示，先天性唇腭的发生率排在首位。对该畸形的治疗手段目前仅限于患者出生后的手术修补，术后仍然不能完全恢复患者语音功能，并影响以后牙齿萌出、排列和患者的心理健康。先天性腭裂属于多基因遗传性疾病，有许多基因协同作用参与疾病的发生。如能明确腭裂的发生机
制，制定相应预防及早期诊断措施，将会有效预防腭裂畸形的发生。因此，有众多学者长期致力于腭裂畸形发生，机制的研究，试图揭示人类腭裂发生的秘密。本研究利用分子生物学的消减杂交技术，直接提取对照组和腭裂组小鼠发育形成期腭突组织中的mRNA，对两者之间差异表达的基因进行克隆和筛选，获得一系列与腭裂发生相关的基因，并初步探讨了相关基因的染色体定位、结构及作用。研究主要分为以下3部分内容
一．RA诱导的MSX-1基因在腭突间充质细胞中表达变化的研究
取妊娠12天CS7BL/6N系孕鼠的腭突组织，组织块培养法对腭突间充质细胞进行原代培养，免疫组化法进行波形丝蛋白、角蛋白、第八因子、NSE、S-100及HNK-1的单抗染色，进行细胞来源鉴定。培养5代后用于实验，分为实验组和空白对照组，实验组加入1×10~(-8)mol/L浓度的ATRA，原位杂交法检测MSX1基因在两组细胞中的表达变化。结果显示：对照组细胞处于增殖状态，MSX1基因表达弱阳性。而RA处理组的细胞出现增殖抑
制，细胞中
MSX基因
第四军医大学博士学位论文 MS川基因表达呈较明显的阳性。原位杂交结果提示
是RA发挥作用的靶基因，它的异常表达干扰了胯突细胞的正常增殖，
二 小鼠胯裂相关基困的克隆及基因表达的意义
在建立的C57BL／6N近交系，J、鼠胯裂模型的基础上，提取妊娠12天69实
验组和对照组胚鼠胯突的1llRNA，反转录合成CDNA，利用基于昨R的改良
消J戍杂交技术首先建立小鼠聘裂差异表达CDNA文库。筛选文库，选取500hp
。人上的片段回收，反向卢、杂交鉴定除去假阳性和假阴性克隆。利用Ge；旧a＊
数据库对测得的基固序列进行核酸序列的同源性比较分析。结果：获得小鼠
）J母乳形成中表达差异的4个新基因，经N0rtherl。blot 鉴定1号新基因为
i亥基因 CDNA全长，定位于，J、鼠 9号染色体，共有碱基 850hp；编码 132个
各基酸，经国际基因命名委员会批准将获得的新基因命名为MCPR．1（1ilo；Ise
cleftoalate related selle）。止匕夕；实验中还克隆三与细胞增殖、生长有关的核
糖体基因士。L27、L23等和小鼠F。U基因。
核糖体蛋白在原核和真核细胞生物中广泛存在，近年来的研究发现它们
与细胞凋亡有密切的关系，应用消减杂交技术克隆凋亡相关基因时，常常能
克隆到核樵体基因。小鼠＊ 基因位于小鼠的第19号染色体长臂，具有管
家基因的特征，广泛表达于胚胎发育期＊、鼠各内脏器官，但尚未见到在胯突
未达的报道，它对细胞的生长具有抑制作用。本研究中核糖体、f。U基因的
表达可能参与了聘突细胞的增殖周期相。制和凋亡过程。
三．MCPR－1、rail基因在小鼠胯突及各脏器组织中的表达变化
原位杂交技术和阿一PCR检测了MCPR－］、厄U基因在实验组、对照组胚
胎小鼠胯突组织，出生 1天和成年鼠各脏器中的表达情况。结果显示：MCPR＊1
基因仅在实验组跨突组织中表达；与对照组小鼠相比 fan基因在实验组中的
表达水平明显增高。叮一阿R结果显示：论叫一1基因在出生后小鼠胯突、。。
）A、肝脏、脑等组织中均无表达；
小鼠。。脏、
fan基因在出生1天及成年小鼠
肝脏、脑等组织中都有表达。本实验结果提示：MCPR－1基因是在＊诱导之
下仅在胚胎跨突组织中表达的基困。而fail基因作为一种管家基因，在实验
业小鼠胯突中的异常高表达，可能在聘突细胞增殖过程中起负向调控作用，
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第四军医大学博士学位论文
间接而参与了聘裂的发生。
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