高中生物实验试剂配制方法
徐以润 江苏灌南县高级中学（222500）
1、斐林试剂
试剂甲：将34.5克结晶硫酸铜溶于500亳升水中，加0.5亳升硫酸，混合均匀。 试剂乙：将125克氢氧化钠和137克酒石酸钾钠溶于500毫升蒸馏水中。（贮于带橡皮塞的瓶中）
※临用时试剂甲与试剂乙等量混合
※斐林试剂是由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀
因此，斐林试剂常用于检测可溶性的还原性糖的存在与否。
2、双缩脲试剂
取10 g氢氧化钠放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。
取1 g硫酸铜放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。
※双缩脲试剂使用时，先向蛋白质溶液中加入NaOH溶液（2mL），振荡摇匀，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，与蛋白质发生紫色反应，
因此，双缩脲试剂常用于检测蛋白质的存在与否
注意∶林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成，但二者有如下三点不同：
（1）溶液浓度不同
斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲，其浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液称为斐林试剂乙，其浓度为0.05g/ml；双缩脲试剂中NaOH溶液（双缩脲试剂A）的浓度为0.1g/ml，CuSO4溶液（双缩脲试剂B）的浓度为0.01g/ml。
（2）使用原理不同
斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu2O沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生紫色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。
（3）使用方法不同 斐林试剂使用时，先将 NaOH溶液和CuSO4溶液混合（将4～5滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中），而后立即使用：双缩脲试剂使用时，先加入NaOH溶液（2mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，振荡摇匀后观察现象。
3、苏丹Ⅲ试剂：（用于脂肪的检测）
0.1克苏丹Ⅲ溶于20毫升95%酒精中，因脂肪可溶于酒精中，因此染色脂肪不得超过10分钟。
4、二苯胺试剂：（用于DNA的鉴定）
将1克二苯胺溶液于100ML冰醋酸中，再加2.75毫升浓硫酸（置冰箱中可保存根6个月，使用前在室温下摇匀）。
5、苔黑酚——乙醇溶液（用于RNA的鉴定）
溶解6克苔黑酚于是100毫升95%乙醇中，（可在冰箱中保存1个月）
6、班氏试剂：（用于尿糖的检测）
溶85克柠檬酸钠及50克无水碳酸钠于400毫升水中。另溶8.5克硫酸铜于500毫升热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠——碳酸钠溶液中，边加边搅拌。如有沉淀可过滤, 此混合液可长期使用。
7、醋酸洋红染液（用于染色体的染色）
冰醋酸45ML＋55ML蒸馏水＋0.5克洋红
先将洋红溶于蒸馏水中，再加入冰醋酸充分摇匀后，加热煮沸 10分钟，待冷却后，即可使用。
8、有丝分裂细胞解离液
38%盐酸和95%酒精按1：1的比例配成解离液。
9、有丝分裂细胞染液
医用紫药水和蒸馏水按1：16的比例混合 配成染色液。
10、吲哚酚试剂（用于VC的鉴定）
将 0.1克吲哚酚粉未溶于是100ML水中。
13、卡诺氏固定液（用于细胞有丝分裂根尖的固定）
酒精：冰醋酸=3：1（体积比）
12、20%肝脏研磨液（用于酶的高效性验证）
1份肝脏4份水。用剪子迅速将肝脏剪碎，先加少量的水研研磨，用剩余的水冲洗。
高中生物实验试剂配制方法
徐以润 江苏灌南县高级中学（222500）
1、斐林试剂
试剂甲：将34.5克结晶硫酸铜溶于500亳升水中，加0.5亳升硫酸，混合均匀。 试剂乙：将125克氢氧化钠和137克酒石酸钾钠溶于500毫升蒸馏水中。（贮于带橡皮塞的瓶中）
※临用时试剂甲与试剂乙等量混合
※斐林试剂是由氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的质量分数为0.05 g/mL的溶液配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀
因此，斐林试剂常用于检测可溶性的还原性糖的存在与否。
2、双缩脲试剂
取10 g氢氧化钠放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。
取1 g硫酸铜放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。
※双缩脲试剂使用时，先向蛋白质溶液中加入NaOH溶液（2mL），振荡摇匀，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，与蛋白质发生紫色反应，
因此，双缩脲试剂常用于检测蛋白质的存在与否
注意∶林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液和CuSO4溶液组成，但二者有如下三点不同：
（1）溶液浓度不同
斐林试剂中NaOH溶液称为斐林试剂甲，其浓度为0.1g/ml,CuSO4溶液称为斐林试剂乙，其浓度为0.05g/ml；双缩脲试剂中NaOH溶液（双缩脲试剂A）的浓度为0.1g/ml，CuSO4溶液（双缩脲试剂B）的浓度为0.01g/ml。
（2）使用原理不同
斐林试剂是新配制的Cu(OH)2溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu2O沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。双缩脲反应实质是在碱性环境下的Cu2+与双缩脲试剂发生的紫色反应。而蛋白质分子中含有很多与双缩脲（H2NOC-NH-CONH2）结构相似的肽键，所以蛋白质都能与双缩脲试剂发生紫色反应，可以用双缩脲试剂鉴定蛋白质的存在。
（3）使用方法不同 斐林试剂使用时，先将 NaOH溶液和CuSO4溶液混合（将4～5滴CuSO4溶液滴入2mlNaOH溶液中），而后立即使用：双缩脲试剂使用时，先加入NaOH溶液（2mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，振荡摇匀后观察现象。
3、苏丹Ⅲ试剂：（用于脂肪的检测）
0.1克苏丹Ⅲ溶于20毫升95%酒精中，因脂肪可溶于酒精中，因此染色脂肪不得超过10分钟。
4、二苯胺试剂：（用于DNA的鉴定）
将1克二苯胺溶液于100ML冰醋酸中，再加2.75毫升浓硫酸（置冰箱中可保存根6个月，使用前在室温下摇匀）。
5、苔黑酚——乙醇溶液（用于RNA的鉴定）
溶解6克苔黑酚于是100毫升95%乙醇中，（可在冰箱中保存1个月）
6、班氏试剂：（用于尿糖的检测）
溶85克柠檬酸钠及50克无水碳酸钠于400毫升水中。另溶8.5克硫酸铜于500毫升热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾入柠檬酸钠——碳酸钠溶液中，边加边搅拌。如有沉淀可过滤, 此混合液可长期使用。
7、醋酸洋红染液（用于染色体的染色）
冰醋酸45ML＋55ML蒸馏水＋0.5克洋红
先将洋红溶于蒸馏水中，再加入冰醋酸充分摇匀后，加热煮沸 10分钟，待冷却后，即可使用。
8、有丝分裂细胞解离液
38%盐酸和95%酒精按1：1的比例配成解离液。
9、有丝分裂细胞染液
医用紫药水和蒸馏水按1：16的比例混合 配成染色液。
10、吲哚酚试剂（用于VC的鉴定）
将 0.1克吲哚酚粉未溶于是100ML水中。
13、卡诺氏固定液（用于细胞有丝分裂根尖的固定）
酒精：冰醋酸=3：1（体积比）
12、20%肝脏研磨液（用于酶的高效性验证）
1份肝脏4份水。用剪子迅速将肝脏剪碎，先加少量的水研研磨，用剩余的水冲洗。